[发明专利]基于DC的乳腺癌治疗性疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其特征在于：所述制 备方法包括以下步骤：

获取未成熟DC；

将乳腺癌抗原复合物与未成熟DC于DC培养基中共培养5～9天；

再加入肿瘤坏死因子-α继续培养，至DC成熟且负载有所述乳腺癌抗原 复合物；

其中，所述乳腺癌抗原复合物是由灭活后的乳腺癌细胞和MUC1单抗复 合物共培养获得的。

2.根据权利要求1所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述未成熟DC与所述乳腺癌抗原复合物的体积比为(3～7)：1。

3.根据权利要求1所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述MUC1单抗复合物的浓度为(0.5～1.5)μg/(1×10⁵)个乳 腺癌细胞。

4.根据权利要求1或3所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法， 其特征在于，所述灭活后的乳腺癌细胞与MUC1单抗复合物共培养的过程， 包括以下步骤：

取灭活后的乳腺癌细胞，加入0.5～2％牛血清白蛋白，再加入MUC1单抗 复合物共培养0.5～1.5小时。

5.根据权利要求4所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述灭活后的乳腺癌细胞获取过程，包括以下步骤：

取对数生长期的乳腺癌细胞，洗涤并离心后，制成(0.5～2)×10⁷个/ml 的乳腺癌细胞悬液，放入液氮中，并于水浴中完全融化，再次放入液氮中， 反复多次置于液氮和水浴中，然后过滤，收集滤液，即灭活后的乳腺癌细胞。

6.根据权利要求1所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述未成熟DC的浓度为(2～5)×10⁵个/ml。

7.根据权利要求6所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述未成熟DC的获取过程包括以下步骤：

取外周血，通过磁珠筛选出CD14⁺单核细胞，加入体外诱导培养基进行 诱导培养2～6天，至CD14⁺单核细胞诱导分化成未成熟DC。

8.根据权利要求1所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述DC培养基中添加有750～850U/mL粒-巨噬细胞和 900～1100U/mL白介素-4的基础培养基。

9.根据权利要求1所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法，其 特征在于，所述肿瘤坏死因子-α在培养基中的终浓度为800～1200U/ml。

10.一种基于DC的乳腺癌治疗性疫苗，其特征在于，由权利要求1-9任 一项所述的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗制备方法所获得的。