[发明专利]基于DC的乳腺癌治疗性疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程和生物医药领域，特别涉及一种基于DC的乳腺癌 治疗性疫苗及其制备方法。

背景技术

乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤，且发病率呈逐年上升趋势。现 有的乳腺癌治疗过程中对患者免疫系统的损害极大，导致肿瘤治疗过程遇到 无法突破的瓶颈，杀瘤能力差，肿瘤无法完全治愈。现阶段细胞因子诱导的 杀伤细胞是具有细胞毒作用的免疫活性细胞；树突状细胞是最具潜力的抗原 提呈细胞，在初始性免疫和获得性免疫中具有重要作用；树突状细胞是已知 机体内抗原提呈递能力最强的细胞，它能捕获抗原，并将信息传递给T、B淋 巴细胞，从而引发一系列的特异性免疫应答反应。因此，如果将肿瘤抗原注 入树突状细胞，将可引起机体特异性的抗肿瘤免疫反应。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中乳腺癌治疗性疫苗存在 免疫反应弱、杀瘤能力差等缺陷，提供一种免疫原性及特异性强的基于DC 的乳腺癌治疗性疫苗及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种基于DC的乳腺 癌治疗性疫苗的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

获取未成熟DC；

将乳腺癌抗原复合物与未成熟DC于DC培养基中进行共培养5～9天；

再加入肿瘤坏死因子-α继续培养，至DC成熟且负载有乳腺癌抗原复合 物；

其中，所述乳腺癌抗原复合物是由灭活后的乳腺癌细胞和MUC1单抗复 合物共培养获得的。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，所述未成 熟DC与所述乳腺癌抗原复合物的体积比为(3～7)：1。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，所述MUC1 单抗复合物的浓度为(0.5～1.5)μg/(1×10⁵)个乳腺癌细胞。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，

所述灭活后的乳腺癌细胞与MUC1单抗复合物共培养的过程，包括以下 步骤：

取灭活后的乳腺癌细胞，加入0.5～2％牛血清白蛋白，再加入MUC1单抗 复合物共培养0.5～1.5小时。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，

所述灭活后的乳腺癌细胞获取过程，包括以下步骤：

取对数生长期的乳腺癌细胞，洗涤并离心后，制成(0.5～2)×10⁷个/ml 的乳腺癌细胞悬液，放入液氮中，并于水浴中完全融化，再次放入液氮中， 反复多次置于液氮和水浴中，然后过滤，收集滤液，即灭活后的乳腺癌细胞。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，所述未成 熟DC的浓度为(2～5)×10⁵个/ml。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，

所述未成熟DC的获取过程包括以下步骤：

取外周血，通过磁珠筛选出CD14⁺单核细胞，加入体外诱导培养基进行 诱导培养2～6天，至CD14⁺单核细胞诱导分化成未成熟DC。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，所述DC培 养基中添加有750～850U/mL粒-巨噬细胞和900～1100U/mL白介素-4的基础培 养基。

在本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗的制备方法中，所述肿瘤坏 死因子-α在培养基中的终浓度为800～1200U/ml。

本发明还提供一种基于DC的乳腺癌治疗性疫苗，由上述基于DC的乳腺 癌治疗性疫苗制备方法所获得的。

实施本发明提供的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗及其制备方法，可以达到 以下有益效果：采用由灭活的乳腺癌细胞和MUC1单抗复合物共同作为肿瘤 抗原信息的提供者共刺激DC，促进DC的抗原提呈，提高机体的免疫反应， 通过本发明获得的基于DC的乳腺癌治疗性疫苗不仅性状较稳定，而且免疫原 性及特异性较强，杀瘤能力较强，能够很好的调节乳腺癌的机体免疫机制。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例， 对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以 解释本发明，并不用于限定本发明。