[发明专利]紫变青霉QL-9204及在转化根皮苷制备根皮素中的应用

说明书

本发明公开了一种紫变青霉QL‑9204及在转化根皮苷制备根皮素中的应用；本发明紫变青霉QL‑9204无毒无害，使用安全的菌种；紫变青霉QL‑9204生长快、抗杂菌能力强、容易培养，批次稳定；发酵培养基成分简单，市场价格低，从而生产成本较低；本发明将底物根皮苷直接投入到粗酶液中转化，免去了酶的分离纯化步骤，工艺简单，易于工业化应用；根皮素的转化得率高，最高可达92.5％，且具有副产物少，产物容易提取等优点。

(一)技术领域

本发明涉及一种根皮素的制备方法，特别涉及一株紫变青霉(Penicilliumpurpurogenum)QL-9204，以及该菌株在转化根皮苷制备根皮素领域中的应用。

(二)背景技术

根皮素(phloretin)，又名三羟苯酚丙酮，CAS号60-82-2，属于二氢查尔酮化合物。化学结构为3-(4-羟基苯基)-1-(2、4、6-三羟基苯基)-1-丙酮，分子式为C₁₅H₁₄O₅，分子量为274.27，纯品为粉红色，易溶于甲醇、乙醇和丙酮，几乎不溶于水，可溶于碱性溶液。根皮素具有很好的抗氧化、抗自由基作用，能抑制黑色素细胞活性，对色斑有很好的淡化作用；不仅如此，根皮素还具有很好的抗炎和免疫抑制作用；最新研究表明根皮素还具有抗肿瘤以及抗癌活性。

根皮素自然存在的形态多是以糖苷形式存在，即根皮苷(phlorizin，CAS号60-81-1)。根皮苷广泛存在于苹果、荔枝等水果中，主要集中在这些植物中的根茎或根皮中。生产根皮素的方法可以采用有机化学方法合成，也可以通过天然的根皮苷经酸碱水解或酶解法获得。目前，有专利报道采用酸碱水解或酶解的方法转化根皮苷为根皮素，但这些技术的应用有一定的限制，如采用酸碱水解法，虽然具有成本低的优势，但存在酸碱残留、转化专一性差和产品需脱色等不足；采用酶解法则需要商品水解酶，且酶不能回收重复利用，导致工艺成本过高。

微生物有着非常强大的酶系和分解转化物质的能力，如果能筛选出转化专一性强的微生物，发酵产生的相应的糖苷酶，用滤除菌体的粗酶液作为转化体系，根皮苷在粗酶液中糖苷酶的作用下转化为根皮素，可以克服酸碱水解和酶解法的不足，因此具有反应条件温和、专一性强、生产成本低和环境友好等优点。

(三)发明内容

本发明目的是提供一株产生糖苷酶的微生物菌株—紫变青霉(Penicilliumpurpurogenum)QL-9204，及其在转化根皮苷制备根皮素中的应用，较好地克服现有酸碱水解法和酶解法制备中专一性差和转化得率低的问题，本工艺具有成本低、流程简单、转化得率高和转化副产物少等优点。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株—紫变青霉(Penicillium purpurogenum)QL-9204，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC No：M 2015781，保藏日期2015年12月25日，地址：中国，武汉，武汉大学；邮编：430072。

本发明所述紫变青霉QL-9204，是从以苹果皮为微生物来源的富集培养物中分离和筛选得到的优良菌株。所述紫变青霉QL-9204的菌落特征如下：接种在马铃薯培养基(PDA)琼脂平板上，28℃培养2天后，平板表面长出白色絮状的菌丝体，气生菌丝长度在1～2mm，菌落边缘呈锯齿状不整齐，继续培养3天后，菌落正面逐渐变灰绿色，背面逐渐变为紫红色。显微镜下观察菌丝孢子丝呈扫帚状，1～2层小梗，分生孢子串呈不分枝的链状，椭圆形，淡黄色，表面粗糙。

所述紫变青霉QL-9204的18s rDNA的部分核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

SEQ ID NO:1：