[发明专利]一种大花蕙兰人工种子制作方法

说明书

一种大花蕙兰人工种子制作方法，包括以下步骤：a)类原球茎诱导：以大花蕙兰无菌苗茎尖为材料接种于类原球茎诱导培养基生长，诱导形成类原球茎；b)原球茎增殖：步骤a)得到的类原球茎在固体增殖培养基生长20‑30天后，转移至液体培养基进行增殖生长20‑30天，增殖之后的大花蕙兰类原球茎用于人工种子制作和包埋；c)大花蕙兰人工种子制作与萌发：将步骤b)得到的类原球茎切分成单个类原球茎，采用海藻酸钠溶液和CaCl₂包埋，凝固形成的人工种子经过无菌和温室萌发。本发明方法可以用于不同大花蕙兰品种的人工种子的制作，温室播种萌发后形成的种苗可以代替常规组培苗进行大花蕙兰种苗的生产，降低大花蕙兰种苗生产成本。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种大花蕙兰人工种子制作方法。

背景技术

大花蕙兰(Cymbidium Hybrid)为兰科兰属植物中的部分大花型附生种的杂交种，是世界上销量最高的洋兰之一。大花蕙兰花色鲜艳、花期长，观赏性极高，深受世界兰花爱好者的欢迎。由于大花蕙兰多为杂交品种，种子自然结实率相当低，且种子发育不完全，没有胚乳，常规情况下极难萌发，需要采用无菌播种技术才能萌发，后代萌发种子多出现性状分离，加之大花蕙兰分株能力弱，因而繁殖困难，繁殖速度慢，远远不能满足商品化生产的要求，而组织培养技术已成为大花蕙兰规模化繁殖与生产的重要手段(陈璋，2004)。国内研究大花蕙兰快速繁殖体系的报道虽多，但多集中在无菌苗增殖等方面，而采用类原球茎液体震荡培养对大花蕙兰增殖和人工种子包埋尚未见报道。

大花蕙兰常规组培苗工厂化生产，通常采用不定芽增殖和生根培养技术，操作步骤繁琐，生长周期长，机械化程度低，费工费时，能耗高，生产成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种大花蕙兰人工种子制作方法，以克服现有技术的上述缺陷。

本发明的技术方案如下：

一种大花蕙兰人工种子制作方法，包括以下步骤：

a)类原球茎诱导：以大花蕙兰无菌苗茎尖为材料接种于类原球茎诱导培养基生长，诱导形成类原球茎；

b)原球茎增殖：步骤a)得到的类原球茎在固体增殖培养基生长20-30天后，转移至液体培养基进行增殖生长20-30天，增殖之后的大花蕙兰类原球茎用于人工种子制作和包埋；

c)大花蕙兰人工种子制作与萌发：将步骤b)得到的类原球茎切分成单个类原球茎，采用海藻酸钠溶液和CaCl₂包埋，凝固形成的人工种子经过无菌和温室萌发。

所述步骤a)中类原球茎诱导为将无菌苗茎尖接种到1/2MS+NAA0.5-2.0mg·L^-1+椰乳50-150ml·L^-1+蔗糖30-40g·L^-1+琼脂5.5-7.0g·L^-1+活性炭1.0g·L^-1的培养基上诱导形成类原球茎。

所述步骤b)中大花蕙兰类原球茎的固体增殖的步骤为：挑选生长状态接近的类原球茎，接种到1/2MS固体培养基添加NAA 1.0-2.5mg·L^-1+6-BA 0.5-1.0mg·L^-1生长20-30天；

所述步骤b)中大花蕙兰类原球茎的液体增殖的步骤为：选用容积为100-500ml的三角瓶为培养容器，将类原球茎接种到1/2MS+NAA2.0-2.5mg L^-1+6-BA 0.5-1.0mg·L^-1液体培养基中，每瓶接种2.0g，培养时间为20-30天，液体生长20天的类原球茎用于人工种子包埋。

所述步骤c)大花蕙兰人工种子制作与萌发包括以下步骤：