[发明专利]用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片及其制备方法

权利要求书

1.一种用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其特征在于，包括以 下步骤：

分别获取脱细胞羊膜和脂肪干细胞；

将所述脂肪干细胞接种于所述脱细胞羊膜于培养基中培养至所述脂肪干 细胞完全覆盖所述脱细胞羊膜。

2.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，在所述脂肪干细胞接种于所述脱细胞羊膜之前，还包括对脱细胞 羊膜进行杀菌的步骤：

取脱细胞羊膜于无菌环境下装入无菌铝箔膜中，抽真空封口，钴60辐照 灭菌3～5小时，辐照剂量为3～5kGy。

3.根据权利要求2所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，将所述所述脂肪干细胞接种于所述脱细胞羊膜时，所述脱细胞羊 膜处于平整状态。

4.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的接种密度为(0.5～5)×10⁴/cm²。

5.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，所述培养基中含有质量分数为10％～20％血清。

6.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，所述脱细胞羊膜的获取过程包括以下步骤：

取胎盘羊膜，去除血块和绒毛膜，用1.0-3.0g/L胰酶于恒温水浴中酶解消 化去除羊膜表面的上皮细胞，清洗后，去除羊膜的海绵层、纤维母细胞层及 浆液性渗出液，再次清洗，即获得所述脱细胞羊膜。

7.根据权利要求1所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的获取过程包括以下步骤：

取脂肪组织，去除血管和纤维，剪碎，洗涤后，离心，吸取中间层脂肪 组织，清洗后再次离心，取上层脂肪组织于质量分数为0.03％～0.06％的Ⅰ型 胶原酶中消化15～30分钟，加入PBS或生理盐水，并吹打组织，制成细胞悬 液，经细胞过滤器过滤，收集滤液，并将滤液以1000～2000转/分的转速离心， 获得细胞沉淀，洗涤细胞沉淀后对其再次离心，收集沉淀，即原代脂肪干细 胞。

8.根据权利要求7所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法，其 特征在于，所述脂肪干细胞的获取过程，还包括对所述原代脂肪干细胞进行 传代培养的过程，具体步骤为：

将所述脂肪干细胞以(3～8)×10⁴个/cm²的密度接种于无血清培养基中进 行原代培养，每隔2～3天更换新的培养基；待细胞融合度达到70～80％后，消 化、洗涤并稀释细胞，然后离心弃上清液，用所述无血清培养基重悬细胞后， 按1：(3～6)进行传代培养，每隔2～3天换液，待细胞融合度达到70～80％后， 重复细胞消化传代的步骤，收集第2～4代脂肪干细胞。

9.一种用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片，其特征在于，由权利要求1-8任 一项所述的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片制备方法所获得的。