[发明专利]用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织工程领域，特别涉及一种用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片 及其制备方法。

背景技术

皮肤是人体与外界环境接触的屏障，不仅起保护、分泌、代谢和感觉等 作用，而且参与免疫反应和维持机体内环境的稳定。作为人体最表露的皮肤， 其受损伤及大面积烫烧伤意外的发生率较高。早期的烧伤创面覆盖可以抑制 细菌生长、预防感染、防止水分及电解质的丢失；自体皮肤移植是治疗烧伤 的首选，但是对于大面积烧伤，自体皮肤不能满足需求，而异体皮肤能引起 明显的免疫排斥，因此，截至目前，严重创伤和大面积烧伤患者的皮源缺乏 仍然是临床亟待解决的难题。

目前，组织工程化皮肤的研究已成为生命科学研究领域的热点之一，而 市场上也已出现用于临床的组织工程皮肤产品，虽有一定的临床效果，但不 仅价格昂贵，技术操作繁琐，有一定的技术难度且成本造价较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中组织工程皮肤覆盖物制 作较繁琐，难度较大且修复效果差等缺陷，提供一种制作简单且修复效果较 好的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种用于治疗皮肤创 伤的羊膜贴片的制备方法，包括以下步骤：

分别获取脱细胞羊膜和脂肪干细胞；

将所述脂肪干细胞接种于所述脱细胞羊膜上于培养基中培养至所述脂肪 干细胞完全覆盖所述脱细胞羊膜。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，在所述脂 肪干细胞接种于所述脱细胞羊膜之前，还包括对脱细胞羊膜进行杀菌的过程， 包括以下步骤：

取脱细胞羊膜于无菌环境下装入无菌铝箔膜中，抽真空封口，钴60辐照 灭菌3～5小时，辐照剂量为3～5kGy。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，将所述脂 肪干细胞接种于所述脱细胞羊膜时，所述脱细胞羊膜处于平整状态。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的接种密度为(0.5～5)×10⁴/cm²。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，所述培养 基中含有质量分数为10％～20％血清。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，所述脱细 胞羊膜的获取过程包括以下步骤：

取胎盘羊膜，去除血块和绒毛膜，用1.0-3.0g/L胰酶于恒温水浴中酶解消 化去除羊膜表面的上皮细胞，清洗后，去除羊膜的海绵层、纤维母细胞层及 浆液性渗出液，再次清洗，即获得所述脱细胞羊膜。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的获取过程包括以下步骤：

取脂肪组织，去除血管和纤维，剪碎，洗涤后，离心，吸取中间层脂肪 组织，清洗后再次离心，取上层脂肪组织于质量分数为0.03％～0.06％的Ⅰ型 胶原酶中消化15～30分钟，加入PBS或生理盐水，并吹打组织，制成细胞悬 液，经细胞过滤器过滤，收集滤液，并将滤液以1000～2000转/分的转速离心， 获得细胞沉淀，洗涤细胞沉淀后对其再次离心，收集沉淀，即原代脂肪干细 胞。

在本发明提供的用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片的制备方法中，所述脂肪 干细胞的获取过程，还包括对所述原代脂肪干细胞进行传代培养的过程，具 体步骤为：

将所述脂肪干细胞以(3～8)×10⁴个/cm²的密度接种于无血清培养基中进 行原代培养，每隔2～3天更换新的培养基；待细胞融合度达到70～80％后，消 化、洗涤并稀释细胞，然后离心弃上清液，用所述无血清培养基重悬细胞后， 按1：(3～6)进行传代培养，每隔2～3天换液，待细胞融合度达到70～80％后， 重复细胞消化传代的步骤，收集第2～4代脂肪干细胞。

本发明还提供一种用于治疗皮肤创伤的羊膜贴片，由上述用于治疗皮肤 创伤的羊膜贴片制备方法所获得的。