[发明专利]一株谷氨酸棒杆菌及其过量合成磷脂酰丝氨酸的方法

权利要求书

1.一种高产磷脂酰丝氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，所述工程菌，是将谷氨酸棒杆菌宿主细胞中表达L-丝氨酸脱氨酶的sdaA基因进行敲除，并串联表达磷脂酰丝氨酸合成酶的表达基因pssA基因、3-磷酸甘油酸脱氢酶的表达基因serA^Δ197基因和CDP-甘油二酯合成酶的表达基因cdsAM基因；

所述pssA基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；

所述serA^Δ197基因来源于谷氨酸棒状杆菌ATCC13032，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.2所示；

所述cdsAM基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.5所示。

2.如权利要求1所述的一种高产磷脂酰丝氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，所述磷脂酰丝氨酸合成酶的表达基因为pssAM基因，pssAM基因为pssA基因的突变基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.4所示。

3.一种CDP-甘油二酯合成酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.6所示。

4.权利要求3所述CDP-甘油二酯合成酶突变体的编码基因，其特征在于，所述基因为cdsAM基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.5所示。

5.如权利要求1所述一种高产磷脂酰丝氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，所述工程菌具体为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)M-1，保藏编号为CGMCCNo.11923，该菌的宿主细胞为谷氨酸棒状杆菌ATCC13032。

6.如权利要求1所述一种高产磷脂酰丝氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，具体如下：

(1)谷氨酸棒杆菌sdaA缺失菌株的构建；

(2)扩增磷脂酰丝氨酸合成酶的表达基因，连接至pXMJ19，构建重组质粒；

(3)以谷氨酸棒杆菌ATCC13032基因组DNA为模板，扩增serA^Δ197基因片段，并连接至步骤(2)所得重组质粒上，构建出新的重组质粒；

(4)扩增CDP-甘油二酯合成酶的表达基因，并连接至步骤(3)所得重组质粒，构建出新的重组质粒；

(5)将步骤(4)所得重组质粒转化至谷氨酸棒杆菌sdaA缺失菌株感受态细胞中；获得了一株过量合成磷脂酰丝氨酸的重组菌株。

7.一种磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，具体如下：

1)菌株：以权利要求1-2所述的工程菌株为生产菌株；

2)培养基

活化斜面或平皿培养基：牛肉膏7～12g/L，酵母粉3～6g/L，蛋白胨7～12g/L，氯化钠3～6g/L，玉米浆120～160mL/L，琼脂条10～40，调节pH至7.0～7.2，121℃灭菌15min；

种子或发酵培养基：葡萄糖20～40g/L，玉米浆15～45mL/L，豆粕水解液10～30mL/L，K₂HPO₃·3H₂O 1～3g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5～2g/L，尿素2～4g/L，调节pH至7.0～7.2，121℃灭菌15min；

3)摇瓶培养

将30℃、150～250rpm下培养10～14小时的种子培养液以2％接种量转入发酵培养基，于30℃、150～250rpm条件下培养，在培养4～8h时加入IPTG终浓度为1.0mmol/L，继续培养22～25h。

8.如权利要求7所述的一种磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述生产菌株为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)M-1，保藏编号为CGMCC No.11923。