[发明专利]一种基于RPA的日本血吸虫核酸检测试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 201610056643.7 | 申请日： | 2016-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN105648059B | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 邢微微;徐东刚;孙魁;王园园;冯惊涛;喻鑫玲;罗志宏;毛金武;付文亮 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 11279 | 代理人： | 丛芳;张鹏 |
| 地址： | 100850*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 rpa 日本 血吸虫 核酸 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种基于RPA的日本血吸虫核酸检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：RPA冻干颗粒，缓冲液，醋酸镁，RPA反应引物，RPA反应探针，所述RPA反应引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.2，所述RPA反应探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.3所示。
2.根据权利要求1所述基于RPA的日本血吸虫核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含双蒸水和日本血吸虫基因组DNA。
3.根据权利要求1所述基于RPA的日本血吸虫核酸检测试剂盒，其特征在于，所述RPA冻干颗粒包含噬菌体重组酶UvsX，辅助因子UvsY，DNA聚合酶，单链DNA结合蛋白，dNTPS。
4.根据权利要求1所述基于RPA的日本血吸虫核酸检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Rehydration Buffer。
5.一种利用权利要求1所述基于RPA的日本血吸虫核酸检测试剂盒的非疾病诊断和治疗目的的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在RPA冻干颗粒中加入29.5μL Rehydration Buffer，2.1μL 10μM Primer A，2.1μL10μM Primer B，0.6μL 10μM探针，10.7μL双蒸水，2.5μL模板，在反应管盖上加醋酸镁2.5μL，上下颠倒反应管使之充分混匀后离心，放置于TwistDX荧光检测器内，仪器自动升温至38℃孵育，在5-20分钟内通过观测荧光曲线进行结果判读；
(2)结果判定：含有日本血吸虫基因组DNA的反应管荧光曲线上升，阴性对照为平滑的直线；
所述Primer A的序列如序列表SEQ ID No.1所示；所述Primer B的序列如序列表SEQID No.2所示；所述探针的序列如序列表SEQ ID No.3所示；所述模板为日本血吸虫基因组DNA。
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