[发明专利]一种同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，特别涉及一种金匮肾气片中同时检测马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚含量的方法。

背景技术

金匮肾气片系六味地黄系列中成药，处方来自“医圣”张仲景之手，记载于《金匮要略》。金匮肾气片用于肾虚水肿，腰膝酸软，小便不利，畏寒肢冷。不仅有六味地黄滋阴补肾的作用，而且能在补阴中助阳，从而达到阴阳同补的目的。

金匮肾气片现行标准收载于国家药品标准WS-10439(ZD-0439)-2002-2011Z，其鉴别标准收载了1个显微鉴别、3个薄层鉴别和2个含量测定，而金匮肾气片处方中有10味药。通过研究发现多种药味的薄层色谱之间均存在阴性干扰，尚无有效分离方法进行鉴别其有效成分，导致现有的质量控制方法未能有效实现产品质量的控制。且现有的2个有效成分的含量测定，需要分别提取供试液及采用不同的色谱系统检测，实验步骤繁琐，且不能全面的监测到产品的质量水平。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法。本方法中所述有效成分为马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚，所述方法为高效液相色谱法，所述色谱条件为：

反相色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；进样量：10μl；

流动相：流动相A：乙腈、流动相B：体积百分比为0.1％的磷酸水溶液，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100％，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱、波长与流速如下：

梯度1---0～15min，流动相A与流动相B的体积百分比为(10～20％)∶(90～80％)，流速为1.0ml/min，检测波长为230～245nm；

梯度2---15～30min，流动相A与流动相B的体积百分比为〔(10～20％)→(65～40％)〕∶〔(90～80％)→(35～60％)〕，流速为1.0ml/min，检测波长为230～245nm；

梯度3---30～55min，流动相A与流动相B的体积百分比为(40～65％)∶(60～35％)，流速为1.0～1.2ml/min，检测波长为284～294nm。

作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中，所述线性梯度洗脱、波长与流速进一步为：

梯度1---0～15min，流动相A与流动相B的体积百分比为15％∶85％，流速为1.0ml/min，检测波长为240nm；

梯度2---15～30min，流动相A与流动相B的体积百分比为(15％→55％)∶(85％→45％)，流速为1.0ml/min，检测波长为240nm；

梯度3---30～55min，流动相A与流动相B的体积百分比为55％∶45％，流速为1.2ml/min，检测波长为286nm。

作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中，所述线性梯度洗脱、波长与流速还可以进一步为：

梯度1---0～15min，流动相A与流动相B的体积百分比为10％∶90％，流速为1.0ml/min，检测波长为235nm；

梯度2---15～30min，流动相A与流动相B的体积百分比为(10％→65％)∶(90％→30％)，流速为1.0ml/min，检测波长为245nm；

梯度3---30～55min，流动相A与流动相B的体积百分比为65％∶35％，流速为1.2ml/min，检测波长为294nm。

作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中，所述线性梯度洗脱中梯度3后面还可以添加一个过渡梯度，所述过渡梯度的流动相比例与所述梯度1相同，并冲洗至基线平稳。以便连续进样。

作为实施方式之一，本发明同时检测金匮肾气片中五种有效成分含量的方法中，对照品溶液的配置方法如下：精密称取马钱苷、京尼平甘酸、毛蕊花糖苷、桂皮醛和丹皮酚对照品，用体积百分比为80％的甲醇溶液溶解并稀释，使每1ml对照品溶液中含有0.10～0.14mg马钱苷、0.04～0.08mg京尼平甘酸、0.07～0.11mg毛蕊花糖苷、0.15～0.25mg桂皮醛和0.15～0.25mg丹皮酚。