[发明专利]一种定点突变创制糯性玉米种质的方法及其应用有效
| 申请号： | 201610060095.5 | 申请日： | 2016-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN107012163B | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 谢传晓;祁显涛;刘昌林;刘方;刘文国;路明 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院作物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;何叶喧 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定点 突变 创制 玉米 种质 方法 及其 应用 | ||
1.培育糯性玉米的方法，包括向目的玉米中导入玉米基因组编辑的载体，得到糯性玉米；所述玉米基因组编辑的载体含有sgRNA编码基因；
所述sgRNA在玉米中识别的靶标DNA为编码Waxy1蛋白的DNA片段，所述Waxy1蛋白为a1)：a1)的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；
所述玉米基因组编辑的载体还含有Cas9蛋白的编码基因和RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子；所述RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子启动所述sgRNA编码基因的转录；
所述sgRNA识别的靶位点为SEQ ID No.2所示的DNA分子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述sgRNA编码基因是SEQ ID No.3的第10087-10191位所示的DNA分子。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子为启动子ZmPolⅢca99，所述启动子ZmPolⅢca99是下述b1所示的DNA分子：b1)SEQ ID No.4所示的DNA分子；
所述Cas9蛋白的编码基因是下述c1所示的DNA分子：c1)SEQ ID No.3自5’末端起第12309-16409位所示的DNA分子。
4.一种玉米基因组编辑的载体，含有Cas9蛋白的编码基因、sgRNA编码基因和RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子；所述RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子启动所述sgRNA编码基因的转录；
所述sgRNA在玉米中识别的靶标DNA为编码Waxy1蛋白的DNA片段，所述Waxy1蛋白为a1)：a1)氨基酸序列是SEQ ID No.5所示的蛋白质；所述sgRNA识别的靶位点为SEQ ID No.2所示的DNA分子。
5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于：所述sgRNA编码基因是SEQ ID No.3的第10087-10191位所示的DNA分子。
6.根据权利要求4所述的载体，其特征在于：所述RNA聚合酶Ⅲ识别的启动子为启动子ZmPolⅢca99，所述启动子ZmPolⅢca99是下述b1)所示的DNA分子：b1)SEQ ID No.4所示的DNA分子；
所述Cas9蛋白的编码基因是下述c1所示的DNA分子：c1)SEQ ID No.3自5’末端起第12309-16409位所示的DNA分子。
7.权利要求4至6中任一所述的载体在培育糯性玉米和/或提高玉米籽粒中支链淀粉含量中的应用。
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