[发明专利]草鱼耐糖性能相关的SNP标记及其应用

权利要求书

1.一种草鱼耐糖性能相关SNP标记，其特征在于，所述标记为包括两个SNP位点H3和H4的SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述H3位于SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列中自5′端起第1817位，且该位置处碱基为T或C；所述H4位于SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列中自5′端起第1818位，且该位置处碱基为G或T。

2.根据权利要求1所述的SNP标记，其特征在于，TTGG基因型个体的耐糖能力显著高于TCGT基因型和CCTT基因型个体。

3.一种用于扩增权利要求1所述SNP标记的片段的引物对1，其特征在于，所述引物对1为SEQ ID NO：2-3所示的核苷酸序列。

4.一种用于检测权利要求1所述SNP标记的引物对2，其特征在于，所述引物对2为SEQID NO：4-5所示的核苷酸序列。

5.权利要求1或2所述SNP标记在鉴别或选育耐高糖草鱼品种中的应用。

6.权利要求3所述引物对1在鉴别或选育耐高糖草鱼品种中的应用。

7.权利要求4所述引物对2在鉴别或选育耐高糖草鱼品种中的应用。

8.一种鉴定草鱼是否为耐高糖品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测草鱼的DNA；

(2)利用权利要求3所述的引物对1，将待测草鱼的DNA进行PCR扩增，以获得SEQ ID NO：1所示的核苷酸片段产物；

(3)利用权利要求4所述的引物对2，将步骤(2)得到的产物进行PCR扩增，并在引物对2的下游引物的3’端引入一个错配碱基，以使获得的扩增产物可以被BsrGI限制性内切酶进行识别；

(4)利用BsrGI限制性内切酶对步骤(3)获得的扩增产物进行酶切，酶切产物利用琼脂糖凝胶电泳并在紫外灯下显色，如果具有216bp单条谱带，其对应的草鱼个体为耐高糖品种；如果具有266bp和216bp两条谱带或266单条谱带，其对应的草鱼个体为非耐高糖品种。

9.根据权利要求8所述的鉴定草鱼是否为耐高糖品种的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，酶切体系为：ddH₂O 43μL，限制性内切酶1μL，PCR产物1μL，10×Buffer 5μL，反应温度为37℃，反应时间为15min。

10.根据权利要求8所述的鉴定草鱼是否为耐高糖品种的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，酶切产物利用2％琼脂糖凝胶，在100V条件下电泳60min。