[发明专利]一种用于串珠藻的培养基及其应用

权利要求书

1.一种适合串珠藻生长的培养基，其特征在于，组分及其浓度：NaNO₃ 2.90-2.94mM，K₂HPO₄ 0.41-0.44mM，KH₂PO₄ 1.27-1.31mM，MgSO₄·7H₂O 0.29-0.31mM，CaCl₂ 0.15-0.18mM，NaCl 0.42-0.44mM，PIV金属溶液5.9-6.1mL/L，维生素B12溶液0.8-1.1mL/L，维生素H溶液0.8-1.1mL/L，维生素B1溶液0.8-1.1mL/L，青霉素-链霉素溶液0.008-0.009mL/L；

所述的PIV金属溶液的组分及其含量：Na₂EDTA·2H₂O 1.9-2.1mM，FeCl₃·6H₂O 0.35-0.37mM，MnCl₂·4H₂O 0.19-0.22mM，ZnCl₂ 0.035-0.038mM，CoCl₂·6H₂O 0.0082-0.0084mM，Na₂MoO₄·2H₂O 0.015-0.018mM；

所述的维生素B12溶液通过如下方法制得：于200mLdH₂O中加入pH7.8的HEPES缓冲液2.39-2.41g和维生素B12 0.025-0.027g；

所述的维生素H溶液通过如下方法制得：于200mLdH₂O中加入pH7.8的HEPES缓冲液2.39-2.41g和维生素H 0.004-0.005g；

所述维生素B1溶液通过如下方法制得：于200mLdH₂O中加入pH7.8的HEPES缓冲液2.39-2.41g和维生素B1 0.066-0.068g。

2.一种串珠藻的液体培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)于灭菌的1L容器中加900mL蒸馏水，搅拌下，按照权利要求1所述培养基组分及其浓度计算各组分加入量，将除了维生素和青霉素-链霉素溶液以外的各组分加入上述容器中；

2)待所有无机盐组分加入后，加入蒸馏水至容器中液体总体积成为1L；

3)用封口膜封盖容器口，置于高温灭菌锅，120℃高温灭菌30min；

4)灭菌完成后，冷却至室温，加入上述组分浓度规定量的维生素B12，维生素H，维生素B1，青霉素-链霉素溶液；

5)得到的液体培养基置于4℃冰箱存储。

3.一种串珠藻的固体培养基平板的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)于灭菌的1L容器中加900mL蒸馏水，搅拌下，按照权利要求1所述培养基组分及其浓度计算各组分加入量，将除了维生素和青霉素-链霉素溶液以外的各组分加入上述容器中；

2)待所有无机盐组分加入后，加入15g琼脂糖，加入蒸馏水至容器中液体总体积成为1L，使用玻璃棒搅拌均匀；

3)用封口膜封盖容器口，置于高温灭菌锅，120℃高温灭菌30min；

4)灭菌完成后，冷却至室温，加入上述组分浓度规定量的维生素B12，维生素H，维生素B1，青霉素-链霉素溶液；

5)在其凝固之前倒入灭菌的培养皿中，制成固体培养基平板，置于4℃冰箱暂时存放。

4.一种串珠藻的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将野外采集的串珠藻放入采集瓶中，瓶中装入生境处洁净清凉的流动水，用于浸泡采集到的藻体；

2)样品带回实验室后，用流动水清洗藻体表面附着物，藻体置于培养皿中，在解剖镜下用镊子、解剖针去除可见的杂物；

3)用解剖刀将藻体切割成若干尽可能小的碎片，将藻体碎片接入权利要求3所制备的固体培养基平板中；

4)将平板置于光照培养箱中培养，培养条件为16.5℃,光照强度为1000Lx，光暗周期各为12小时；

5)待藻体发育为肉眼可见的藻丝后，将其转入装有权利要求2所制备的液体培养基的锥形瓶中进行后续培养，锥形瓶中还添加灭菌的陶粒作为培养基质，将培养体系置于恒温震荡器中，设置培养温度为16.5℃，震荡频率为120r/min。