[发明专利]一种巯基蛋白酶的提取方法

说明书

本发明公开了一种巯基蛋白酶的提取方法。所述的提取方法包括以下步骤：(1)将木薯淀粉磁性微球，与含有巯基蛋白酶的溶液混合后进行振荡吸附；(2)将步骤(1)的反应液进行磁性分离后，将木薯淀粉磁性微球进行洗脱，即可。本发明的分离方法操作简单，时间短，设备要求简单，且平衡吸附量较高。

技术领域

本发明涉及一种巯基蛋白酶的提取方法。

背景技术

木薯淀粉磁性微球是以磁性Fe₃O₄及天然高分子物质木薯淀粉为原材料的一种可生物降解功能材料。目前，国内外研究大多采用合成高分子材料为壳制备高分子磁性微球，而以天然高分子物质木薯淀粉为原材料，相对于合成高分子材料具有可降解性、无毒性、生物相容性、环境友好且来源丰富等特点。高分子磁性微球既具有高分子的特性，可通过交联、共聚、接枝、表面改性等赋予其多种性能。高分子磁性微球又因具有磁响应性，在外加磁场作用下可迅速分离，且操作简便，至今，在生物分离如细胞分离、标记、核酸排序等，生物医学如靶向给药、临床诊断，和生物工程如作为载体酶的固定化等方面得到快速的发展。近年来，磁性高分子微球的特殊性能和其显示的广阔应用前景受到人们的广泛关注，使得高分子磁性微球在多个领域显示出强大的生命力，已渗透到分离工程等许多领域。

巯基蛋白酶是指一类活性中心含有巯基(半胱氨酸)，并且依靠巯基催化水解肽键的蛋白水解酶，包括溶菌酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶等。以木瓜蛋白酶为例，其可水解多肽中赖氨酸、精氨酸和蛋白质的羧基端，是一种可食用的活性半胱氨酸蛋白酶。它具有天然、卫生安全、酶活高且热稳定性好等特点，不仅在广泛应用于食品、饲料、日化等方面，在医药、皮革及纺织等行业也有了一定的应用，目前主要应用于肉的嫩化和啤酒的澄清等。木瓜蛋白酶主要存在于番木瓜的根、茎、叶和果实中，其含量在未成熟的乳汁中最丰富。由于木瓜蛋白酶为天然产物，如何从植物中更快更好的分离成为科研工作者们的研究热点。

目前提取木瓜蛋白酶的技术多样，主要包括亲和层析法、超滤法、有机溶剂法、盐析法、絮凝法和喷雾干燥法等。亲和层析法分离得到的酶纯度高，但前处理液需进行初步纯化，且层析法操作过程繁琐，不易进行工业化生产；超滤法因木瓜蛋白酶为大分子物质，在超滤过程中易聚积在膜表面，产生浓差极化现象，导致超滤速率下降；有机溶剂法程序复杂，过程采用了大量的机物质，易产生有机溶剂残留和木瓜蛋白酶易变性等问题；盐析法使用大量的盐，产生较大灰分，易使酶变性，得到产品的活性较低；絮凝法由于其专一性不强，分离得到的木瓜蛋白酶含较多杂质，纯度不高；喷雾干燥法易发生木瓜蛋白酶粘结在容器壁导致活性降低等问题。

文献《功能纳米颗粒对木瓜蛋白酶吸附动力学及热力学研究》报道利用壳聚糖磁性微球吸附分离木瓜蛋白酶，但是其对木瓜蛋白酶的平衡吸附量较低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中巯基蛋白酶分离过程复杂，步骤繁多，而提供了一种巯基蛋白酶的提取方法。本发明的分离方法操作简单，时间短，设备要求简单，且平衡吸附量较高。

发明人经过试验创造性地发现将木薯淀粉磁性微球应用于巯基蛋白酶的吸附分离，运用磁性分离技术，在短时间内实现快速分离，可将许多烦琐复杂的操作简单化，使传统测试的周期大大缩短。

本发明提供了一种巯基蛋白酶的提取方法，其包括以下步骤：(1)将木薯淀粉磁性微球，与含有巯基蛋白酶的溶液混合后进行振荡吸附；(2)将步骤(1)的反应液进行磁性分离后，将木薯淀粉磁性微球进行洗脱，即可。

本发明所述的巯基蛋白酶是指本领域中的一类活性中心含有巯基(半胱氨酸)，并且依靠巯基催化水解肽键的蛋白水解酶，一般包括溶菌酶、菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶等。