[发明专利]一种奶牛金黄色葡萄球菌α-溶血素亚单位疫苗的制备方法及应用

权利要求书

1.一种奶牛金黄色葡萄球菌α-溶血素亚单位疫苗的制备方法，其特征在于：

1)金黄色葡萄球菌α-溶血素蛋白的第37位的组氨酸定点突变为丙氨酸，并克隆，所述α-溶血素蛋白为SEQ ID NO.1所示的氨基酸组成的蛋白质；

2)重组α-溶血素蛋白在大肠杆菌表达系统中的表达，并用镍柱亲和层析和Resource S柱纯化；

3)将重组α-溶血素蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀后得到奶牛金黄色葡萄球菌α-溶血素亚单位疫苗；其中，步骤3)中的可接受佐剂为ISA 206VG，所述可接受佐剂与所述重组α-溶血素蛋白的体积比为54：46，疫苗中重组α-溶血素蛋白终浓度为25μg/mL。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：

1)将定点突变的α-溶血素蛋白基因克隆到pET28a载体中；

2)将步骤1)获得的表达载体转化E.coli BL21(DE3)，诱导表达获得重组α-溶血素蛋白；

3)使用镍柱亲和层析和Resource S柱纯化步骤2)得到的重组α-溶血素蛋白；

4)将纯化得到的重组α-溶血素蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀后得到奶牛金黄色葡萄球菌α-溶血素亚单位疫苗。