[发明专利]用于检测具有国家限量标准的5种食品致病菌的引物组合及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测具有国家限量标准的5种食品致病菌的引物组合及其应用。本发明提供的引物组合由引物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组成。引物组Ⅰ由Ⅰ‑F3、Ⅰ‑B3、Ⅰ‑FIP、Ⅰ‑BIP、Ⅰ‑LF和Ⅰ‑LB组成，引物组Ⅱ由Ⅱ‑F3、Ⅱ‑B3、Ⅱ‑FIP、Ⅱ‑BIP、Ⅱ‑LF和Ⅱ‑LB组成，引物组Ⅲ由Ⅲ‑F3、Ⅲ‑B3、Ⅲ‑FIP、Ⅲ‑BIP、Ⅲ‑LF和Ⅲ‑LB组成，引物组Ⅳ由Ⅳ‑F3、Ⅳ‑B3、Ⅳ‑FIP、Ⅳ‑BIP、Ⅳ‑LF和Ⅳ‑LB组成，引物组Ⅴ由Ⅴ‑F3、Ⅴ‑B3、Ⅴ‑FIP、Ⅴ‑BIP、Ⅴ‑LF和Ⅴ‑LB组成，依次如序列1至30所示。本发明可用于检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157、单核细胞增生李斯特氏菌或副溶血性弧菌，具有重大的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测具有国家限量标准的5种食品致病菌的引物组合及其应用。

背景技术

沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157、单核细胞增生李斯特氏菌和副溶血性弧菌是重要的食源性致病菌，已被我国列为食品安全的常规检测项目，并且针对这5种菌制订了致病菌限量标准。沙门氏菌病是重要的人畜共患病原菌，其广泛分布于自然界，主要以家畜、家禽、肉制品和蛋为传播载体，可引起食物中毒、胃肠炎、人类的伤寒及副伤寒等肠道疾病，严重者可导致死亡，是各国公认、全球报道最多、世界最常见引发食源性疾病暴发的首要病原菌，也是我国食源性疾病的主要病原体；金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，近年来由其引起的食物中毒已呈现出全球的分布状态，已经成为世界公共卫生的一个重要问题。它不仅存在于速冻米面制品中，乳制品和肉类等也通常含有金黄色葡萄球菌的肠毒性菌株，进食被金黄色葡萄球菌污染的食物易导致恶心、呕吐、腹痛、腹泻等急性胃肠炎症状，严重的会导致死亡；大肠埃希氏菌O157是近几十年来新发现的食源性强致病菌，牛肉、生奶、鸡肉及其制品，蔬菜、水果及制品等均可引起污染，其中牛肉是最主要的传播载体。感染少量即可致病，致死率高，能够引起顽固性腹泻及溶血性尿毒症等各种并发症，严重威胁公共卫生安全；单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的食源性致病菌，广泛存在于自然界中，，主要传播媒介为乳制品、肉制品、水产品、果蔬和即食食品，人类受感染后主要表现为败血症、脑膜炎、胃肠炎、孕妇流产等症状。婴幼儿，老年人及免疫耐受病人临床死亡率为30％左右，很多国家都已经采取措施以控制食品中的单核细胞增生李斯特氏菌，并制定了相应的标准；副溶血性弧菌广泛分布于海水和海产品中，是引起食源性疾病暴发的重要病原菌之一，能够引起人类肠胃炎，我国沿海城市副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发在全部食源性疾病暴发中已占首位，部分地区已占到60％左右。

基于传统分离方法的国标法GB依然是目前很多检测机构在进行具有国家限量标准的5种食品致病菌检测的主要依据。主要包括增菌培养，平板分离，生化鉴定等步骤。检测方法繁琐，检测时间长，灵敏度低，容易发生漏检和错检，传统的检测方法已无法满足目前食品快速检测的要求。近几年发展起来的分子检测技术,特别是PCR技术,在微生物快速鉴定和检测方面的应用,为食源性致病菌的快速检测开辟了新的途径。但是,PCR存在检测时间长、易污染、假阳性率高的缺点,使其应用受到限制。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的核酸扩增技术,其原理是在一种具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下，识别6～8个区域的4～6条引物，在等温条件下快速、特异地扩增目的基因，可推广应用于快速、准确的检测常见的食源性微生物。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测具有国家限量标准的5种食品致病菌的引物组合及其应用。

本发明首先提供了一种引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ、引物组Ⅲ、引物组Ⅳ和引物组Ⅴ组成；

(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ和所述引物组Ⅴ中的任意两个、任意三个或任意四个组成；