[发明专利]一种布美诺肽的固相合成方法

说明书

本发明属于多肽合成领域，具体涉及以Rink Amide Resin为固相载体，以HO‑(CH₂)_n‑COOH作为连接固相载体与目标肽的Linker，其中，羧基端通过酰胺键与固相载体相连，羟基端通过酯键与目标肽相连。该技术方案与现有技术相比，通过在固相载体及布美诺肽之间引入长链脂肪酸，大大优化了目标肽固相成环的空间环境，避免了液相方式成环时所发生的分子间偶联，最终目标肽‑Linker纯度达到85％以上，纯化总收率达到50％以上，精肽纯度达到99％以上。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种以长链脂肪酸做Linker进行布美诺肽固相合成的方法。

背景技术

布美诺肽，英文名称为Bremelanotide，又称布雷默浪丹，PT141，由7个氨基酸组成，与α-促黑素细胞激素具有相同的核心序列，后者的受体在食欲及性欲唤起中起重要作用。其肽序为AC-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]_cycle-OH，结构式如下：

性功能障碍分为男性性功能障碍及女性性功能障碍，目前用于治疗男性性功能障碍的药物多数为磷酸二酯酶5(PDE-5)抑制剂，例如西替那非，他达拉非，伐地那非。此类药物的作用机制为维持或者升高体内环腺苷酸(cAMP)的浓度，增加动脉血液流入，降低静脉血液流出，从而导致阴茎血流增加，但此类药物对女性性功能障碍不具有显著疗效。

女性性反应周期是复杂的并且取决于生理，心理因素，用于女性性功能障碍的药物必须针对并且必须依赖中枢神经系统，而动物和人类的研究都已经表明布美诺肽具有明显的与局部生殖器血管充血无关的中枢神经系统效应。与其它多肽类药物相似，布美诺肽剂量少，疗效高，不会引发蓄积中毒，因此，在治疗女性性功能障碍上有广阔的市场前景。

目前，布美诺肽的合成方法主要为固相合成法。专利CN200610086841.4采用逐步合成的方法，肽树脂合成结束后，选择性脱除Asp及Lys的保护基，之后在树脂上成环，最后以HF裂解，因为HF的剧烈腐蚀性而导致该方法无法大规模使用，其实施例公布的精肽收率为30～35％；专利CN200710048824.6同样采用选择性脱保护的方法，但其所选择的的脱保护方法在脱除Asp及Lys侧链保护基的同时也会脱除His的保护基，其实施例公布的粗肽收率为80％；专利CN200910131598.7布雷默浪丹的固相合成方法中将对羟基苯甲酸连接在RinkAmide Resin之后，采用普通氨基酸原料逐步合成，合成结束后以TFA裂解，在液相条件下成环，但是该方法在进行液相成环时容易发生分子间偶联，产生二聚体，三聚体等多聚物，严重降低合成收率，此外，该专利在树脂与肽链间连接的对羟基苯甲酸分子较小，无法提供足够大的空间改善固相成环反应。

布美诺肽是由7个氨基酸组成的环肽，其合成的技术难点在于成环。目前布美诺肽的合成技术根据成环方法可分为两类，一类是液相中成环，一类是树脂上成环。在液相中成环容易产生大量分子间偶联产物，固相成环方法又因空间位阻太大而导致成环困难。

发明内容

为解决布美诺肽合成的技术难点，本发明提供一种以长链脂肪酸做Linker进行布美诺肽固相合成的方法。具体为以Rink Amide Resin为固相载体，以HO-(CH₂)_n-COOH作为连接固相载体与目标肽的Linker，其中，羧基端通过酰胺键与固相载体相连，羟基端通过酯键与目标肽相连。目标肽合成结束后，选择性脱除Asp及Lys的侧链保护基，在树脂上成环，环化结束后裂解，得布美诺肽-(CH₂)_n-NH₂，碱性条件下断开酯键，得布美诺肽粗肽，经过纯化，冻干后得布美诺肽精肽。

本发明的技术方案如下：

布美诺肽的固相合成方法，包括如下步骤：