[发明专利]一种高纯度环黄芪醇生产精制的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种高纯度环黄芪醇生产精制的新方法。

背景技术

黄芪中的有效成分包括黄酮类，皂苷类，多糖类及氨基酸类。其中黄芪皂苷具有强心、降压、抗肿瘤、降低糖尿病大鼠血糖和促进胰岛素分泌等作用。从黄芪根中已分离鉴定出数十种黄芪皂苷，黄芪甲苷为皂苷的主要有效成分。环黄芪醇(Cycloastragenol)，属于三萜皂苷类化合物，主要由黄芪甲苷(AstragalosideⅣ)的水解得到，物理性质为无味、无定型白色粉末。环黄芪醇是从黄芪中发现的端粒酶激活剂，通过增加端粒酶活性，延缓端粒变短，从而被认为具有延缓衰老的作用。中国专利CN1809364B提出以酸水解黄芪甲苷，经硅胶柱层析纯化得到环黄芪醇的方法，但实践证明其生成开环副产物-黄芪醇的比例较高且工艺复杂，难以工业化生产的问题。中国专利CN103880910B采用氧化还原的方法制备环黄芪醇，反应步骤较多，使用了强氧化剂高碘酸、高碘酸钠或高碘酸钾，强还原剂硼氢化钠、硼氢化钾等，且反应过程中加入乙二醇后产生大量甲醛，对操作人员产生一定伤害，不符合绿色环保的要求。

发明内容

本发明的目的是提出一种高纯度环黄芪醇生产精制的方法，该方法反应条件温和，操作方便，适合大规模工业化生产。本方法使用80%以上黄芪甲苷为原料，采用两相酶水解的方法对黄芪甲苷进行水解，然后再采用萃取，重结晶方法得到高含量的环黄芪醇。

环黄芪醇化学结构式如下：

黄芪醇（环黄芪醇开环副产物）结构如下：

一种高纯度环黄芪醇生产精制的方法，包括以下步骤：

A、两相酶水解反应

使用黄芪甲苷为原料，将其加入PH为5-9的缓冲溶液中，黄芪甲苷和缓冲溶液的固液质量比例为1:50-1:100，充分搅拌形成悬浮液；向悬浮液中加入水解酶，黄芪甲苷和水解酶的质量比为1:1-9:1；加入非水溶性有机溶剂，使之成两相，有机溶剂和缓冲溶液体积比为0.5:1-3:1；在25-45℃条件下酶水解20-60h；

B、萃取

酶水解反应结束后，静置待水相和有机相完全分离后，取上层有机相溶液；然后加入一定量的非水溶性有机溶剂到缓冲溶液中进行萃取，有机溶剂和缓冲溶液的体积比为0.5:1-3:1；静置待水相和有机相完全分离后，取上层有机相溶液；合并两次有机相溶液，过滤，减压回收有机相溶液得到环黄芪醇的粗品；

C、重结晶

取上述环黄芪醇粗品加入到重结晶溶剂中，环黄芪醇粗品和溶剂质量比为1:30-1:80,加入溶剂质量0.05%-0.2%的活性炭，温度25-90℃充分搅拌10-120min；过滤，将其放入温度为10至-25℃的冰柜中放置，析出环黄芪醇晶体，过滤，干燥即得大于或等于95%纯度的环黄芪醇。

上述两相酶水解反应中黄芪甲苷的原料含量应不低于80%。

上述非水溶性有机溶剂为正丁醇，乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，石油醚或其混合物。

上述水解酶为β-葡萄糖苷酶，蜗牛酶，柚苷酶，纤维素酶或以上几种酶的组合。

上述重结晶溶剂为乙酸乙酯，石油醚，甲醇，乙醇，氯仿，二氯甲烷，丙酮或其混合物。

本发明和现有的技术相比，优势在于：

一、黄芪甲苷原料采用两相酶水解的方法进行水解，反应步骤少，转化率较高，并有效的避免了专利CN1809364B在实际操作过程中采用酸水解易导致产生开环副产物-黄芪醇的问题。酶水解温度为25-45℃，反应溶剂为水、少量有机溶剂，有机溶剂全部回收，可重复

二、本发明中环黄芪醇精制采用结晶的方法和其他专利中使用硅胶柱上样洗脱进行纯化相比较，具有操作方便，操作效率高，更加适合进行工业化推广。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步说明，但不以此作为对本发明的限制。

实施例1

A、两相酶水解

1000ml0.02MKH₂PO₄-NaOHPH5.0缓冲溶液中，加入20g90%黄芪甲苷和4.0gβ-葡萄糖苷酶搅拌混悬，加入1000ml乙酸乙酯，缓慢搅拌，在37℃反应48h；

B、萃取