[发明专利]一种灵敏检测微量细胞及组织中过氧化氢酶活性的检测方法

权利要求书

1.化学发光法检测动物细胞核组织提取物中过氧化氢酶活性的方法,主要涉及生物化学技术领域,解决了现有检测过氧化氢酶（CAT）的很多方法所存在的流程设计复杂，操作繁琐，检测灵敏度低，成本高的问题。

2.（1）该方法的步骤和条件如下：

步骤一、取新鲜或超低温保存的组织和细胞，加入10%NP-40，pH为8.0的磷酸盐缓冲液，使用组织匀浆器粗提；

步骤二、使用超声破碎仪200w，5s，5次；13000rpm/min，4℃条件下离心10min后取上清液即为含过氧化氢酶的混合酶液，保存于0~4℃备用；

步骤三、将含有过氧化氢酶的酶混合液与过氧化氢在室温下孵育3min；

步骤四、将步骤三中孵育过的过氧化氢反应液加入鲁米诺-过氧化氢-氯化钴反应液中，形成化学发光体系；

步骤五、将步骤四中的反应体系注入到化学发光仪中，对其化学发光值进行检测1min，以此间接检测CAT的活性。

3.（2）根据权利要求1所述的化学发光法检测动物细胞和组织提取物中过氧化氢酶活性的方法，其特征在于，该方法的过氧化氢酶来源为动物细胞和组织提取物。

4.（3）根据权利要求1所述的化学发光法检测动物细胞即组织提取物中过氧化氢酶活性的方法，其特征在于，该方法反应体系（即鲁米诺-过氧化氢-氯化钴）中的各溶液终浓度为：

① 过氧化氢浓度为2.68mM

② 氯化钴的浓度为15uM

③ 鲁米诺的浓度为54uM

（4）根据权利要求1所述的化学发光法检测动物细胞及组织提取物中过氧化氢酶活性的方法，其特征在于，该方法所使用的过氧化氢酶的范围为：20U/ML~100000U/ML

（5）化学发光法测定组织样品中过氧化氢酶活性的应用

（6）化学发光法测定细胞样品中过氧化酶活性的应用。