[发明专利]目标细胞的多重捕获配体修饰的多层纳米粒柔性支架及其应用

权利要求书

1.一种多层纳米粒柔性支架，其特征在于，包括氨基化载体基质和氨基化SiO₂纳米粒，其中所述氨基化载体基质为由含氨基的硅烷化试剂进行氨基硅烷化后在表面形成有多氨基的普通玻璃、石英玻璃和高分子聚合物中的一种，其中所述氨基化SiO₂纳米粒为由含氨基的硅烷化试剂进行氨基硅烷化后在表面形成有多氨基的SiO₂纳米粒；所述氨基化载体基质的表面通过酰胺化反应与游离的多羧基大分子形成酰胺键将该游离的多羧基大分子固载于氨基化载体基质表面形成固定大分子接枝链，所述游离的多羧基大分子为多羧基聚合物，且该游离的多羧基大分子上的羧基为经羧基活化试剂活化后的羧基；所述氨基化SiO₂纳米粒的表面通过酰胺化反应与固定大分子接枝链的多羧基大分子形成酰胺键将该氨基化SiO₂纳米粒固载于固定大分子接枝链上形成纳米粒子层；所述纳米粒子层的氨基化SiO₂纳米粒通过酰胺化反应与游离多羧基大分子形成酰胺键将游离的多羧基大分子固载于纳米粒子层的表面，再次形成固定大分子接枝链；依次重复纳米粒子层的固载和固定大分子接枝链的固载形成依次重复的纳米粒子层和固定大分子接枝链，构成所述多层纳米粒柔性支架。

2.根据权利要求1所述的多层纳米粒柔性支架，其特征在于，所述氨基化载体基质为毛细管状结构和平板状结构的氨基化载体基质，且所述多层纳米粒柔性支架的层数为单层或2-30层。

3.根据权利要求1所述的多层纳米粒柔性支架，其特征在于，所述含氨基的硅烷化试剂为3-氨丙基三乙氧基硅烷，所述羧基活化试剂为EDC·HCl和sulfo-NHS。

4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的多层纳米粒柔性支架，其特征在于，所述多层纳米粒柔性支架是通过包括下述步骤的制备方法制备得到的：

S1：氨基化SiO₂纳米粒的制备：采用正硅酸乙酯、氨水、无水乙醇和水制备得到SiO₂颗粒，并将该SiO₂颗粒复溶于水中形成SiO₂纳米粒溶液；使用含氨基的硅烷化试剂、无水乙醇和水制备得到硅烷化水解液，将所述SiO₂纳米粒溶液加入所述硅烷化水解液中常温超声反应后进行分离干燥得到氨基化SiO₂纳米粒；

S2：氨基化载体基质的制备：将载体基质经水清洗、无水乙醇清洗、双氧水-硫酸洗液加热清洗、去离子水清洗后吹干，再置于含氨基的硅烷化试剂的无水乙醇溶液中进行反应后得到氨基化载体基质；

S3：羧基经活化的聚丙烯酸溶液的制备：在聚丙烯酸中加入三蒸去离子水摇匀后加入羧基活化试剂，37℃水浴活化60 min后得到羧基经活化的聚丙烯酸溶液，即羧基经活化的PAA-NHS溶液；

S4：多层纳米粒柔性支架的制备：将氨基化载体基质置于羧基经活化的PAA-NHS溶液中于37℃下进行反应后，用三蒸去离子水洗涤氨基化载体基质后吹干；将经吹干的氨基化载体基质置于使用氨基化SiO₂纳米粒制备形成的氨基化SiO₂纳米粒水溶液中，于37℃下进行反应后用三蒸去离子水洗涤氨基化载体基质后吹干；再次将上述经吹干后的氨基化载体基质置于羧基经活化的PAA-NHS溶液于37℃下进行反应后，用三蒸去离子水洗涤氨基化载体基质后吹干；依次重复该步骤中氨基化SiO₂纳米粒的固载和羧基经活化的PAA-NHS的反应过程后，得到所述多层纳米粒柔性支架。

5.一种目标细胞的多重捕获配体修饰的权利要求1至3中任一权利要求所述多层纳米粒柔性支架，其特征在于，在所述多层纳米粒柔性支架的固定大分子接枝链上，利用最后固载的固定大分子接枝链上经羧基活化试剂活化后的羧基与捕获配体上的氨基进行酰胺化反应形成酰胺键，将所述捕获配体固定连接于所述多层纳米粒柔性支架上，其中所述捕获配体为带有氨基的抗体和带有氨基的核酸适体中的一种。

6.一种包括权利要求5所述目标细胞的多重捕获配体修饰的多层纳米粒柔性支架的体外流通捕获系统，其特征在于，包括捕获管、恒温水导管和抗凝剂注入管；其中所述捕获管包括毛细管载体基质、固载于所述毛细管载体基质上的多层纳米粒柔性支架和固定于该多层纳米粒柔性支架上的捕获配体；所述捕获配体为带有氨基的抗体和带有氨基的核酸适体中的一种。