[发明专利]一种模式拟南芥的嫁接方法

说明书

本发明公开了一种模式植物拟南芥的嫁接方法，其包括以下步骤：将下胚轴粗壮、长势一致、且真叶刚刚萌发的6天‑8天苗龄的拟南芥植株用于嫁接；将用于嫁接的砧木和接穗材料置于1.2％琼脂糖凝胶中间，于下胚轴处横切，并保证接穗材料的下胚轴部分较短，而砧木材料的下胚轴部分较长；在琼脂凝胶上使材料切口紧密接触，并切割一块大于砧木根部面积的1/2MS+3％蔗糖固体培养基，盖在砧木的根部，形成嫁接体；将嫁接体置于21℃环境下垂直培养7天；待嫁接口愈合后将嫁接体转入以1/4MS为液体培养基的水培设备中培养。本发明解决了由于拟南芥植株细弱带来的操作困难，切口不圆整，接穗侧根频生，嫁接成活率低等问题。

技术领域

本发明涉及植物嫁接领域，尤其涉及一种模式植物拟南芥的嫁接方法。

背景技术

开展园艺作物砧木与接穗间相互作用机制的研究，对于科学选择砧穗组合具有重要意义。但由于人们对园艺作物遗传背景了解较少，限制了进一步深入阐述砧穗互作的分子机制。模式植物拟南芥以种子繁殖，出苗整齐，生长周期短，遗传背景清晰，是进行分子机理研究的非常合适的材料。关于拟南芥嫁接技术相关报道较少，且由于拟南芥植株小，下胚轴细弱，材质较软等问题，在嫁接过程中容易存在以下问题，最终降低嫁接成活率：

拟南芥植株小，下胚轴细弱，不易进行嫁接操作，如何培养获得下胚轴粗壮的适宜嫁接操作的拟南芥植株是一个亟需解决的问题。拟南芥嫁接对其下胚轴进行切割时，存在切口易被刀片压扁，难以保持切口圆整，嫁接面变小，影响嫁接口愈合的问题。拟南芥材质较软，嫁接后不能像木本植物那样直立培养，平置是用到的最多的培养方法，但平置培养时，由于拟南芥叶片对生，接穗叶片的生长极易导致嫁接口的错位，降低嫁接成活率。嫁接后，砧木根的生长势势必会有一个相对较低的时期，而此时接穗部分极易于下胚轴部位自行长出侧根，从而保证自身植株的生长，而侧根的萌发会影响嫁接口的愈合及砧木主根的生长，降低嫁接成活率。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供的一种模式植物拟南芥的嫁接方法，以提高拟南芥嫁接的成活率。

为解决上述技术问题，本发明技术方案包括：

一种模式植物拟南芥的嫁接方法，其包括以下步骤：

A、将拟南芥种子经表面消毒后，接种于高温高压灭菌的添加4％蔗糖的1/2MS固体培养基中，经4℃低温春化处理后，置于弱光下处理3天-5天，再转入光下培养3天-5天，待下胚轴生长至6毫米-8毫米，将下胚轴粗壮、长势一致、两片子叶平展且真叶刚刚萌发的6天-8天苗龄的拟南芥植株用于嫁接；

B、用镊子分别取出作为砧木和接穗的拟南芥实生苗，置于事先准备的多个无菌1.2％浓度琼脂糖凝胶板上，将另一无菌1.2％浓度琼脂糖凝胶板盖于相应实生苗下胚轴上，并于下胚轴偏上部位置迅速切断嫁接材料，要求切口圆整，并保证接穗材料的下胚轴部分较短，而砧木材料的下胚轴部分较长；

C、将切好的嫁接材料转入0.7-0.8％浓度琼脂凝胶上，将琼脂凝胶切除一段宽为0.5厘米-1厘米的长条；将长为5毫米、内径/外径为0.5/1.5的塑料管以垂直于琼脂凝胶切口边缘的方式平置于凝胶上，并保证塑料管管口距离切口的距离为2毫米；将砧木与接穗分别插入塑料管内进行固定，使材料紧密接触，并使接穗材料的叶片部分置于切除条状凝胶处；切割一块大于砧木根部面积的1/2MS+3％蔗糖固体培养基，盖在砧木的根部，挤出气泡，使凝胶与培养基紧密结合，形成嫁接体；

D、将嫁接体置于21℃环境下垂直培养7天，待嫁接口愈合后，将成活的嫁接苗转入以1/4MS为液体培养基的水培设备中继续培养，期间接穗下胚轴如有侧根发出，则及时剪去。

所述的嫁接方法，其中，上述步骤A中具体为培养用于嫁接拟南芥植株之蔗糖浓度筛选过程如下：