[发明专利]一种花生黄色斑点病毒检测试剂盒及其检测方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于植物病毒检测技术领域，具体涉及一种花生黄色斑点病毒检测试剂盒 及其检测方法与应用。

背景技术

花生黄色斑点病毒（Groundnutyellowspotvirus，GYSV）属于布尼亚病毒科 （Bunyaviridae）番茄斑萎病毒属（Tospovirus）成员。GYSV最早在印度花生上报道，随后在 云南辣椒上也发现该病毒，该病毒在花生和辣椒上的症状均表现为初期叶片上有黄色斑 点，后期黄色斑点逐渐扩大成为坏死斑块，辣椒果实上的症状主要表现为黄化和坏死斑块。 GYSV在云南辣椒上检出率不高，主要原因可能与该病毒只能由茶黄硬蓟马传播，而茶黄硬 蓟马在云南报道尚少，但是一旦具备适宜的条件该病毒也能大面积爆发，引起辣椒等作物 的产质量损失，因此研究并获得一种快速鉴定该病毒病原的检测方法对于该病害的防控技 术具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种花生黄色斑点病毒检测试剂盒；第二目的在于提 供所述的花生黄色斑点病毒检测试剂盒的检测方法；第三目的在于提供所述的花生黄色斑 点病毒检测试剂盒的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，包括盒体、硝酸纤维素膜、显色液试剂瓶、抗体 试剂瓶、对照试剂瓶；

所述的显色液试剂瓶包括显色试剂瓶A和显色液试剂瓶B；

所述的抗体试剂瓶包括一抗试剂瓶和二抗试剂瓶；

所述的对照试剂瓶包括GYSV标准阳性对照试剂瓶和GYSV标准阴性对照试剂瓶。

本发明的第二目的是这样实现的，包括以下步骤：

1）根据检测样品数量剪下硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜的一角剪去，用以指示膜方 向。

2）检测样品加入洗涤缓冲液研磨，移液器取2.5μl研磨液点至硝酸纤维膜方框 中，同时点上标准阳性对照和标准阴性对照，室温放置或37℃放置至膜彻底干燥；

3）将膜移至容器，加入封闭缓冲液，室温或37℃封闭1h；

4）在封闭缓冲液中加入一抗，室温摇床摇匀，37℃培育1h或4℃培育过夜；

5）弃去一抗培育液，洗涤缓冲液洗膜3次，每次5min；

6）弃去洗涤缓冲液，加入封闭缓冲液，再在封闭缓冲液中加入二抗，室温摇床摇匀，37 ℃培育1h或4℃培育过夜；

7）弃去二抗培育液，洗涤缓冲液洗膜3次，每次5min；

8）弃去洗涤缓冲液，显色缓冲液洗膜1次，每次5min；

9）弃去显色缓冲液，加入显色液黑暗处显色，充分显色后将膜移至清水中终止显色，分 析并记录检测结果。

本发明的第三目的是这样实现的，所述的花生黄色斑点病毒检测试剂盒在检测花 生黄色斑点病毒中的应用。

本发明的优点：

通过原核表达的方法制备了云南辣椒上新topoviruses分离物花生黄色斑点病毒N蛋 白，免疫家兔获得了高效价的花生黄色斑点病毒兔抗血清，优化并组装了该新分离物的 dot-ELISA检测试剂盒，并应用于田间样品的快速检测，通过该试剂盒的研制，可快速、准 确、大量的检测田间疑似样品中携带花生黄色斑点病毒的带毒情况，为病害防控提供检测 技术保障。

附图说明

图1为辣椒植株上GYSV的检测点样图；

图2为辣椒植株上GYSV的检测检测结果图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以 限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的花生黄色斑点病毒花生黄色斑点病毒（Groundnutyellowspot virus，GYSV）检测试剂盒，包括盒体、硝酸纤维素膜、显色液试剂瓶、抗体试剂瓶、对照试剂 瓶；

所述的显色液试剂瓶包括显色试剂瓶A和显色液试剂瓶B；

所述的抗体试剂瓶包括一抗试剂瓶和二抗试剂瓶；

所述的对照试剂瓶包括GYSV标准阳性对照试剂瓶和GYSV标准阴性对照试剂瓶。

所述的硝酸纤维素膜设有方格，方格中空白处用以点样。

所述的显色液试剂瓶A含有NBT显色液；显色液试剂瓶B含有BCIP显色液。