[发明专利]长期保存牡蛎样品中脂溶性贝类毒素的检测方法在审
申请号: | 201610077534.3 | 申请日: | 2016-02-01 |
公开(公告)号: | CN107024547A | 公开(公告)日: | 2017-08-08 |
发明(设计)人: | 徐静;张琳;邵筠乔;曹际娟 | 申请(专利权)人: | 徐静;张琳;邵筠乔;曹际娟 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/86 |
代理公司: | 大连格智知识产权代理有限公司21238 | 代理人: | 刘晓琴 |
地址: | 116001 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 长期 保存 牡蛎 样品 中脂溶性 贝类 毒素 检测 方法 | ||
1.长期保存牡蛎样品中脂溶性贝类毒素的检测方法,包括如下步骤:
(1)待测样品预处理;
(2)提取样品游离脂肪酸;
(3)游离脂肪酸三氟化硼甲酯化后气相色谱检测;
(4)结果校正。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的步骤(4)结果校正根据公式i~iv进行:
(a/4+83.8/6000)*20=(a/4+103.27/6000)*Xm i
(a/4+83.8/6000)*20=(a/4+111.10/6000)*Xn ii
(a/4+83.8/6000)*20=(a/4+111.99/6000)*Xp iii
(a/4+83.8/6000)*20=(a/4+144.47/6000)*Xq iv
其中a是原始采集牡蛎样品中脂溶性贝类毒素的含量,Xm、Xn、Xp和Xq分别为保存第m、n、p、q天的样品取样量,其中m、n、p、q各自独立地地选自0~8的整数。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述的m、n、p、q分别是1、3、5、7。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的步骤(1)是:将保存的去壳牡蛎样品至于室温下使冷冻样品融化呈半冷冻状态,除去牡蛎外部附着的冰片,并用吸水纸吸除表面水分后,用绞碎机打碎并称量备用。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述的保存的牡蛎样品的保存温度是0~4℃、-10℃或-20℃。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的步骤(2)包括如下步骤:
2A.提取样品总脂肪
取牡蛎碎肉样品10g,于100mL离心管中,加入二氯甲烷和甲醇按照体积比2:1的混合溶液50mL以及丁羟甲苯10ul,然后均质匀浆1min、4000r/min条件下离心5min;取出离心管后,取下层溶液于50mL具塞试管中,加入5mL 的0.88%KCl溶液后轻轻震荡混匀,混匀过程中不断开盖放气;过夜分层后取下层液体到250mL圆底烧瓶中进行减压浓缩真空干燥,得粘稠状油状物,即为样品总脂肪粗品;
2B.提取游离脂肪酸
①Amberlyst-26阴离子交换树脂的活化:
称取5g A-26树脂,加入50mL浓度为0.5mol/L的NaOH溶液,用恒温震荡器以60r/min振摇30min,倒掉NaOH液,用高纯水洗树脂3次,每次皆用10mL高纯水并振摇20min,用30mL甲醇洗3次,每次皆用10mL甲醇且振摇20min,重复上述甲醇洗树脂一次,将A-26树脂保存于甲醇中。
②提取游离脂肪酸
经过减压浓缩得到总脂肪后,在圆底烧瓶中加入15mL丙酮和甲醇按照体积比2:1的混合溶液以及250mg Amberlyst-A26阴离子交换树脂,置于恒温振荡器中,以水平60r/min震荡2h后去除溶液,用丙酮-甲醇溶液洗5次,最后在旋转蒸发仪在常温下以低于50r/min的转速吹干,即得样品中的游离脂肪酸。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述的步骤(3)包括如下步骤:
3A.游离脂肪酸的三氟化硼甲酯化
在圆底回流瓶中加入5mL 0.5mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液混匀后连接回流装置。在100℃水浴中加热回流6~8min,然后加3mL三氟化硼-10%甲醇溶液反应5min,取出冷凝装置将回流瓶冷却至室温后加入2mL正己烷,将液体转入15mL离心管中,后用3mL饱和氯化钠溶液清洗平底烧瓶三次,合并饱和氯化钠溶液于15mL离心管,振摇后以4000r/min离心5min;吸取上层溶液约lmL于样品瓶中作为测试液,供气相色谱仪检测;
3B.气相色谱检测
气相毛细管色谱柱内壁涂有固定液100%二氰丙基聚硅氧烷,型号CNW CD-2560,100m×0.25mm i.d×0.2μm;
检测器:氢火焰离子化检测器;
检测器温度:280℃;
进样口温度:260℃;
气化室温度:250℃;
柱温箱温度:初始温度140℃,保持5min,以4℃/min升温至240℃,保持15min;
载气:N2,载气流速1.0mL/min;分流比100∶1;
进样量1μL。
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