[发明专利]4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法

权利要求书

1.一种4-松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，其特征在于：包括继代芽壮苗培养、生根培养基配制、生根培养、炼苗、移栽5个工序，其操作步骤如下：

（1）继代芽壮苗培养：采用常规继代培养基进行继代芽的增殖培养；当继代芽单芽长度达到1.0cm时，增加光照促使单芽老练；

（2）生根培养基配制：培养基配方采用2/5～4/5改良WPM培养基或1/5～3/5改良B5培养基附加IBA 0.05～1.5 mg/L、ABT6号 0.05～1.5 mg/L、蔗糖15000 mg/L、琼脂6.0g/L，在洁净的环境中，将培养基按照配方配制好后，持续煮沸20分钟，调节pH值至5.8～6.0，加入抑菌剂后混匀，分装在一次性聚乙烯塑料杯中，每杯用保鲜膜覆盖并用橡胶圈固定，待降温凝结后使用；

（3）生根培养：将步骤（1）继代芽继续培养使芽伸长，选择长度1.0cm以上，并且绿色明显加深，稍木质化的单芽在超净台中剪下，并接种于步骤（2）中配制好的生根培养基中生根培养；

（4）炼苗：当步骤（3）单芽生根培养至根系长度达到1.5cm后，将瓶苗移至室外具有遮阴装置的大棚中进行炼苗，遮阴度要求为75～85 %，炼苗10～15天；

（5）移栽：将步骤（4）炼苗后的小苗从杯中取出，清水洗去根系附着的培养基，移栽至消毒处理后淋透清水的红心土或轻基质营养杯中，用塑料薄膜和遮阴网进行保湿遮阴2～3天后，按常规方法管护，当苗高30cm以上、无病虫害的4-松油醇型互叶白千层组培苗木出圃造林；

步骤（2）中所述的抑菌剂成分为：头孢霉素50～150mg/L， 50％的可湿性粉剂多菌灵4～10%，4-松油醇型互叶白千层枝叶浸出液1～5%；所述的4-松油醇型互叶白千层枝叶浸出液的制备方法为：取一年生4-松油醇型互叶白千层枝叶250g，剪短至5cm小段后加入试剂瓶中，再加入75%的酒精1L并密封，置于4℃冰箱中浸泡48小时，过滤获得浸出液；

步骤（3）所述生根培养的条件为：温度（28～30）±2℃，光照1500～3000 lx，每日光照12 ～16小时；

所述改良WPM培养基的组分和体积重量比为：NH₄NO₃330 mg/L、CaCl₂·2H₂O96 mg/L、MgSO₄·7H₂O370 mg/L、KH₂PO₄170 mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O180 mg/L、KI 0.83mg/L、MnSO₄·H₂O22.4 mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O0.025 mg/L、Na₂·EDTA37.3 mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、肌醇200mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5 mg/L、盐酸硫胺素1.0 mg/L、甘氨酸2.0 mg/L；

所述改良B5培养基的组分和体积重量比为：KNO₃ 2500 mg/L、CaCl₂•2H₂O150 mg/L、MgSO₄•7H₂O250mg/L、(NH₄)₂SO₄134mg/L、NaH₂PO₄•H₂O150mg/L、Ca(NO₃)₂•4H₂O 200mg/L、KI0.83mg/L、H₃BO₃3.0mg/L、MnSO₄•H₂O10mg/L、ZnSO₄•7H₂O2.0mg/L、Na₂MoO₄•2H₂O0.25mg/L、CuSO₄•5H₂O0.025mg/L、Na₂•EDTA 37.3mg/L、FeSO₄•7H₂O27.8 mg/L、肌醇200mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素1.0mg/L、甘氨酸 2.0 mg/L。

2.根据权利要求1所述的4-松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，其特征在于：步骤（2）中所述的洁净的环境，是指配制培养基专用实验室，实验室内的实验台面及周围操作空间，用75%酒精喷雾消毒；分装过程中的其他用具均用0.3%的新洁尔灭浸泡消毒15分钟，聚乙烯塑料杯为一次性使用。