[发明专利]4‑松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物无性快繁技术领域，涉及组培苗的生根方法，尤其是涉及一种4-松油醇型互叶白千层组培苗的开放式生根培养方法。

背景技术

互叶白千层 (Melaleuca ahemifolia)是桃金娘科白千层属的一种香料植物，90年代初从澳大利亚引种至我国南方，目前在广西、广东、云南和福建等省份都有种植。互叶白千层的茎和叶经过水蒸气蒸馏而得的精油也称茶树油，既是天然香料，又具有强力杀菌作用，经济价值较高。

互叶白千层的种子多为败育，发芽率低，且种间差异大，所以目前互叶白千层的繁育主要采用扦插和组培两种，其中组培繁育的高效、快速及稳定性使其更具备市场竞争力。

互叶白千层精油成分中，最主要的有效成份为4-松油醇，经研究人员多年选育，已选育出多个松油醇含量较高的4-松油醇型互叶白千层优良品种，但较高的松油醇成分在组培繁育时表现出对根系萌发的负面影响，使现有的组培技术生根率有限。本发明摒弃了现有的互叶白千层组培技术中广泛采用的MS及其系列改良培养基，而是在WPM和B5培养基的基础上，通过优化调整培养基成分，有效降低了松油醇对生根率的影响，并且通过添加适宜的抑菌剂，建立的稳定、高效的4-松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，为4-松油醇型互叶白千层良种组培快繁助力。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种4-松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，从而为其商业化快速繁育提供技术条件。

本发明的技术方案是：

通过优化调整培养基的成分及比例，筛选得到可以促进4-松油醇型互叶白千层组培继代芽生根的培养基配方，添加适宜的抑菌剂，再辅以适宜的温度和光照，建立4-松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法。

本发明是这样实现的：

一种4-松油醇型互叶白千层组培继代芽的开放式生根培养方法，包括继代芽壮苗培养、生根培养基配制、生根培养、炼苗、移栽5个工序，其操作步骤如下：

（1）继代芽壮苗培养：采用常规继代培养基进行继代芽的增殖培养；当继代芽单芽长度达到1.0cm时，增加光照促使单芽老练；

（2）生根培养基配制：培养基配方采用2/5～4/5改良WPM培养基或1/5～3/5改良B5培养基附加IBA0.05～1.5mg/L、ABT6号0.05～1.5mg/L、蔗糖15000mg/L、琼脂6.0g/L，在洁净的环境中，将培养基按照配方配制好后，持续煮沸20分钟，调节pH值至5.8～6.0，加入抑菌剂后混匀，分装在一次性聚乙烯塑料杯中，每杯用保鲜膜覆盖并用橡胶圈固定，待降温凝结后使用；

（3）生根培养：将步骤（1）继代芽继续培养使芽伸长，选择长度1.0cm以上，并且绿色明显加深，稍木质化的单芽在超净台中剪下，并接种于步骤（2）中配制好的生根培养基中生根培养；

（4）炼苗：当步骤（3）单芽生根培养至根系长度达到1.5cm后，将瓶苗移至室外具有遮阴装置的大棚中进行炼苗，遮阴度要求为75～85 %，炼苗10～15天；

（5）移栽：将步骤（4）炼苗后的小苗从杯中取出，清水洗去根系附着的培养基，移栽至消毒处理后淋透清水的红心土或轻基质营养杯中，用塑料薄膜和遮阴网进行保湿遮阴2～3天后，按常规方法管护，当苗高30cm以上、无病虫害的4-松油醇型互叶白千层组培苗木可出圃造林。

以上步骤（2）中所述的洁净环境，是指配制培养基专用实验室，实验室内的实验台面及周围操作空间，用75%酒精喷雾消毒；分装过程中的其他用具均用0.3%的新洁尔灭浸泡消毒15分钟，聚乙烯塑料杯为一次性使用。

以上步骤（2）中所述的抑菌剂成分为：头孢霉素50～150mg/L，50％的可湿性粉剂多菌灵4～10%，4-松油醇型互叶白千层枝叶浸出液1～5%。

以上所述的4-松油醇型互叶白千层枝叶浸出液的制备方法为：取一年生4-松油醇型互叶白千层枝叶250g，剪短至5cm小段后加入试剂瓶中，再加入75%的酒精1L并密封，置于4℃冰箱中浸泡48小时，过滤获得浸出液。