[发明专利]一种松叶化学成分的分离方法

权利要求书

1.一种松叶化学成分的分离方法，其中，所述化学成分为桦木糖苷和massonianosideC，所述松叶为马尾松的松叶，其特征在于包含以下步骤：(1)供试品溶液的制备：称取松叶提取物适量，加入有机溶剂提取，提取液静止沉淀，取上清液，浓缩后冷冻干燥，将干燥产物溶解于超纯水中，过滤后收集滤液即得；

(2)分离：取步骤(1)中供试品溶液，以极性反相十八烷基硅烷色谱柱为固定相，以含有甲酸的甲醇溶液-含有甲酸的水溶液为流动相，进行梯度洗脱，分别收集保留时间为8.0-9.0min的馏分F1和保留时间为20.5-22min的馏分F2；

(3)纯化：取步骤(2)中馏分F1和F2，分别以反相十八烷基硅烷色谱柱为固定相，20:80的含有甲酸的乙腈溶液-含有甲酸的水溶液为流动相，等度洗脱，分别收集保留时间为3.8-4.6min的馏分F1-1和保留时间为14.6-15.5min的馏分F2-1；(4)分离：取步骤(3)中馏分F1-1和馏分F2-1，分别以亲水性填料色谱柱为固定相，90:10的含有甲酸的乙腈溶液-含有甲酸的水溶液为流动相，进行等度洗脱，收集F1-1中保留时间为12.3-12.7min的馏分F1-2和F2-1中保留时间为16.7-17.3min的馏分F2-2，其中F1-2为桦木糖苷，F2-2为massonianosideC。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(2)中所述含有甲酸的甲醇溶液为含有0.1％甲酸的甲醇溶液。

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(2)中所述含有甲酸的水溶液为含有0.1％甲酸的水溶液。

4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(2)中所述梯度洗脱条件为：0-35min，25％-60％含有0.1％甲酸的甲醇溶液，35-36min，60％-95％含有0.1％甲酸的甲醇溶液，36-55min，95％-95％含有0.1％甲酸的甲醇溶液。

5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(3)或(4)中所述含有甲酸的乙腈溶液为含有0.1％甲酸的乙腈溶液。

6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(3)或(4)中所述含有甲酸的水溶液为含有0.1％甲酸的水溶液。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离方法，其特征在于所述步骤(2)或(3)或(4)中检测波长为280nm。

8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(1)中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯中的一种或多种的混合物。

9.根据权利要求8所述的分离方法，其特征在于步骤(1)中所述有机溶剂为甲醇或70％的乙醇溶液。

10.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(1)中所述过滤方式为微孔滤膜。

11.根据权利要求10所述的分离方法，其特征在于步骤(1)中所述微孔过滤的孔径为0.22μm或0.45μm。

12.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于步骤(1)中所述提取步骤为回流提取或超声提取。

13.根据权利要求8-12中任一项所述的分离方法，其特征在于步骤(1)为称取松叶提取物，分两次各加入甲醇，每次超声1小时，静置沉淀，取上清液，60℃下真空旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，将干燥产物溶解于超纯水中，过0.45μm滤膜，即得；其中松叶提取物与每次超声提取所用甲醇的质量体积比为7:100。