[发明专利]一种松叶化学成分的分离方法

说明书

本发明涉及一种松叶化学成分的分离方法，其中，所述化学成分为桦木糖苷和massonianoside C，其特征在于包含以下步骤：供试品溶液的制备，分离，纯化，再次分离等，本发明分离方法减少了有机溶剂的使用量，溶剂易于回收利用，方法简单易于放大。

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种松叶化学成分的分离方法。

背景技术

松叶(松针)为松科(Pinaceae)植物最主要的副产物，是松属药用的代表部位。我国松科植物主要有马尾松、油松、华山松、樟子松、湿地松等等，其中，马尾松是我国南方最主要的松属植物。近百年的研究发现，松针提取物具有镇痛、抗炎、镇静、镇咳、祛痰、平喘、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗突变、抗肿瘤等一系列药理活性，由于其资源丰富、功效多样而引起学者们对松针化学成分的深入研究。近些年对松针中主药的化学成分的研究主药集中在挥发油、黄酮类化合物、原花青素、木脂素、莽草酸、维生素、酚类等物质上；分离制备松针中具有代表性的高纯度化合物单体成为一个重要的研究内容，尤其是松针中的部分专属性化学成分的提取分离对于松针药材的质量研究具有重要意义。目前松针中单体化学成分的分离方法主要是从植物原料中提取分离，所涉及的分离手段以硅胶和凝胶柱层析为基础，这些传统方法制备得到的单体化合物纯度较低，且步骤繁琐、周期长、重复性较差，难以应用于工业大生产。因此松针中化合物单体的分离方法急需改善，需要有一种快速、高效、重现性好的分离手段来满足对松针中高纯度单体化合物制备的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、快速、高效地从松针中提取分离单体化合物的方法，其技术方案如下：

本发明一方面提供一种松叶化学成分的分离方法，其中，所述化学成分为桦木糖苷和massonianoside C，具体方法包含以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：称取松叶提取物适量，加入有机溶剂提取，提取液静止沉淀，取上清液，浓缩后冷冻干燥，将干燥产物溶解于超纯水中，过滤后收集滤液即得；

(2)分离：取步骤(1)中供试品溶液，以极性反相十八烷基硅烷色谱柱为固定相，以含有甲酸的甲醇溶液-含有甲酸的水溶液为流动相，进行梯度洗脱，分别收集保留时间为8.0-9.0min的馏分F1和保留时间为20.5-22min的馏分F2；

(3)纯化：取步骤(2)中馏分F1和F2，分别以反相十八烷基硅烷色谱柱为固定相，20:80的含有甲酸的乙腈溶液-含有甲酸的水溶液为流动相，等度洗脱，分别收集保留时间为3.8-4.6min的馏分F1-1和保留时间为14.6-15.5min的馏分F2-1；

(4)分离：取步骤(3)中馏分F1-1和馏分F2-1，分别以亲水性填料色谱柱为固定相，90:10的含有甲酸的乙腈溶液-含有甲酸的水溶液为流动相，进行等度洗脱，收集F1-1中保留时间为12.3-12.7min的馏分F1-2和F2-1中保留时间为16.7-17.3min的馏分F2-2；其中F1-2为桦木糖苷，F2-2为massonianoside C。

其中，步骤(2)中所述含有甲酸的甲醇溶液优选为含有0.1％甲酸的甲醇溶液；所述含有甲酸的水溶液优选为含有0.1％甲酸的水溶液；所述梯度洗脱条件优选为：0-35min，25％-60％含有0.1％甲酸的甲醇溶液，35-36min，60％-95％含有0.1％甲酸的甲醇溶液，36-55min，95％-95％含有0.1％甲酸的甲醇溶液。

所述步骤(3)或(4)中所述含有甲酸的乙腈溶液优选为含有0.1％甲酸的乙腈溶液；所述含有甲酸的水溶液优选为含有0.1％甲酸的水溶液。

所述步骤(2)、(3)、(4)检测波长优选为280nm；