[发明专利]一种用微生物酶法合成苄基异硫氰酸酯的方法

权利要求书

1.一种体外制备苄基异硫氰酸酯的方法，包括如下步骤：将7种反应底物和6种蛋白配制成反应体系，反应后获得所述苄基异硫氰酸酯；

所述7种反应底物分别为苯丙氨酸、半胱氨酸、腺嘌呤核苷三磷酸、还原型辅酶Ⅱ、尿苷二磷酸葡萄糖、3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸和磷酸吡哆醛；

所述6种蛋白分别为MA2R2蛋白、MB1R2蛋白、METC蛋白、UGT74B1蛋白、SOT18蛋白和BMYR蛋白；所述MA2R2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述MB1R2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述METC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；所述UGT74B1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示；所述SOT18蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.9所示；所述BMYR蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.11所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述MA2R2蛋白是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将SEQ ID No.2所示的MA2R2基因导入大肠杆菌进行原核表达，获得所述MA2R2蛋白。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述MB1R2蛋白是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将SEQ ID No.4所示的MB1R2基因导入大肠杆菌进行原核表达，获得所述MB1R2蛋白。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述METC蛋白是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将SEQ ID No.6所示的METC基因导入大肠杆菌进行原核表达，获得所述METC蛋白。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述UGT74B1蛋白是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将SEQ ID No.8所示的UGT74B1基因导入大肠杆菌进行原核表达，获得所述UGT74B1蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述SOT18蛋白是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将SEQ ID No.10所示的SOT18基因导入大肠杆菌进行原核表达，获得所述SOT18蛋白。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述BMYR蛋白是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将SEQ ID No.12所示的BMYR基因导入大肠杆菌进行原核表达，获得所述BMYR蛋白。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述反应的条件为：37℃反应0.5-1h，加入有机溶剂后在60℃反应1h。

9.用于体外制备苄基异硫氰酸酯的成套蛋白质，由6种蛋白组成；所述6种蛋白分别为MA2R2蛋白、MB1R2蛋白、METC蛋白、UGT74B1蛋白、SOT18蛋白和BMYR蛋白；所述MA2R2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述MB1R2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述METC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；所述UGT74B1蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.7所示；所述SOT18蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.9所示；所述BMYR蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.11所示。

10.用于体外制备苄基异硫氰酸酯的成套基因，由6种基因组成；所述6种基因分别为MA2R2基因、MB1R2基因、METC基因、UGT74B1基因、SOT18基因和BMYR基因；所述MA2R2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述MB1R2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述METC基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；所述UGT74B1基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.8所示；所述SOT18基因的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；所述BMYR基因的氨基酸序列如SEQ ID No.12所示。