[发明专利]干扰ABCB5基因表达的载体及其在肿瘤干细胞治疗中的应用

权利要求书

1.一种干扰ABCB5基因表达的载体，其特征在于：载体含有干扰ABCB5基因表达的核苷酸序列，所述干扰ABCB5基因表达的核苷酸序列为包含RNA的正义链、发夹结构和反义链的如SEQ ID NO：1 所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的干扰ABCB5基因表达的载体，其特征在于：扩增所述干扰ABCB5基因表达的核苷酸序列的上游引物序列是如SEQ ID NO: 4 所示的核苷酸序列，下游引物序列是如SEQ ID NO: 5 所示的核苷酸序列；所述干扰ABCB5基因表达的核苷酸序列中发夹结构的核苷酸序列是如SEQ ID NO: 3 所示的核苷酸序列。

3.权利要求2所述的干扰ABCB5基因表达的载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）上、下游引物退火，形成含有如SEQ ID NO: 2 所示核苷酸序列的双链；

（2）退火完成的双链和载体用BamHI和HindIII酶切；

（3）酶切后的双链与载体连接；

（4）将连接后的载体转化到大肠杆菌中，进行单克隆筛选和扩增；

（5）对获得的单克隆进行DNA序列测定分析。

4.权利要求1 所述的干扰ABCB5基因表达的载体在制备针对黑色素瘤干细胞药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于干扰ABCB5基因表达的载体以乏氧特异性的减毒沙门氏菌VNP20009为载体。

6.权利要求1所述的干扰ABCB5基因表达的载体在制备降低肿瘤对化疗耐受的药物中的应用。