[发明专利]干扰ABCB5基因表达的载体及其在肿瘤干细胞治疗中的应用

说明书

本发明公开了一种干扰ABCB5基因表达的载体及其在肿瘤干细胞治疗中的应用。本发明的一种干扰ABCB5基因表达的载体，包括发夹结构，所述干扰ABCB5基因表达的载体的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本发明所述的干扰ABCB5基因表达的载体在制备针对黑色素瘤干细胞治疗药物中的应用。本发明提供了一种全新的、高效的、安全的、低廉的、方便的干扰小鼠黑色素瘤干细胞基因ABCB5表达的载体及其应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及干扰ABCB5基因表达的载体及其在肿瘤干细胞治疗中的应用。

背景技术

黑色素瘤是皮肤癌中最危险的一种，其恶性程度高，侵袭性强，是皮肤癌死亡的主要原因之一。近年来随着我国经济的发展，人民生活习惯的变化，恶性黑色瘤已成为我国所有恶性肿瘤中发病率增长最快者之一。由于恶性黑色素瘤早期症状较轻，不易引起患者重视，容易错过早期诊断和治疗。恶性黑色素瘤一旦发生转移，病情进展迅速，放化疗效果差，死亡率高。目前主要治疗黑色素瘤的化疗药物包括亚硝基脲类、紫杉醇、长春生物碱等，但是这些药物都没有显著提高黑色素瘤病人的生存率，究其原因，发现肿瘤细胞对化疗药物产生耐受是限制其疗效的主要原因，因此迫切需要解决黑色素瘤对化疗药物耐受的问题。

越来越多研究表明肿瘤内存在一类肿瘤干细胞，这类细胞与肿瘤化学治疗的耐药现象相关。肿瘤干细胞一般处于静止状态，过表达抗凋亡蛋白和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白等而获得耐药性。因此针对不同肿瘤干细胞的耐药机制，制定出相应的耐药治疗策略，可以增加化疗效果，提高患者生存时间。

RNA 干扰是将双链RNA(double strained RNA，dsRNA) 导入细胞内引起特异靶基因mRNA 降解的一种细胞反应过程，它是一种转录后的基因沉默(PTGS) 现象。关于RNAi 机制的探讨还不够完善，目前研究比较明确的结论是：Dicer 是特异性核糖核酸酶家族的一个成员，与内源性mRNA 互补的外源性dsRNA 与Dicer 结合，被切割成2l ～ 23nt 长的小片段，即小分子干扰核糖核酸(siRNA)。一部分siRNA 与Dicer 形成RNA 诱导的沉默复合体(RNA-inducing silencing complex，RISC)，RISC 再与目标基因转录出的mRNA 结合并降解该mRNA ；部分siRNA 可作为引物，以mRNA 为模板合成新的dsRNA，这些新合成的dsRNA又可以与Dicer 结合并被切割成siRNA，从而产生级连、放大和传递效应，沉默该基因。

目前临床研究试图通过ABC转运体蛋白抑制剂联合化疗药物克服肿瘤干细胞耐药性，然而临床效果甚微，推测其原因可能有抑制剂与其他化疗药物联用影响了其药物动力学，以及ABC抑制剂可能不能有效杀死肿瘤干细胞等；除此以外，ABC转运蛋白在血脑屏障，胎盘中高表达以避免血液中有毒物质影响，因此需要设计一个针对肿瘤干细胞的干扰系统，特异性杀伤肿瘤干细胞，改善其对化疗药物的耐受而避免对正常干细胞的毒害。

目前，缺乏一种高效的干扰ABCB5基因表达的载体及其在肿瘤干细胞治疗中的应用。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种高效安全的干扰ABCB5基因表达的载体及其在肿瘤干细胞治疗中的应用。

进一步地，本发明提供了一种克服黑色素瘤对化疗药物耐受的方法。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：本发明的一种干扰ABCB5基因表达的载体，包括发夹结构，其特征在于：所述干扰ABCB5基因表达的载体的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO ：1 所示的核苷酸序列。

进一步地，所述干扰ABCB5基因表达的载体的上游引物序列是SEQ ID NO: 4 所示的核苷酸序列，所述干扰ABCB5基因表达的载体的下游引物序列是SEQ ID NO: 5 所示的核苷酸序列；所述干扰ABCB5基因表达的载体的发夹结构的核苷酸序列是SEQ ID NO: 3 所示的核苷酸序列。