[发明专利]鉴定猴头菇猴杰2号或大猴头的引物对及方法

说明书

本发明公开了一种鉴定猴头菇猴杰2号或大猴头的引物对及方法。所述引物对包括上游引物和下游引物，上游引物为：5′‑ATTAGCTTGACGTACAGACAGTCG‑3′，下游引物为：5′‑TGTTGGAGCAAGGGTGATACGA‑3′。本发明引物对为猴头菇猴杰2号和大猴头共有特异性分子标记，利用包含所述引物对的PCR方法来鉴定猴头菇猴杰2号或大猴头，具有检测时间短、准确性高、容易判断、重复性好等优点，且可以进行快速的早期鉴别。

技术领域

本发明涉及分子鉴定技术领域，特别是涉及一种鉴定猴头菇猴杰2号或大猴头的引物对及方法。

背景技术

猴头菇(Hericium erinaceus)，又叫猴头菌，只因外形酷似猴头而得名。猴蘑，猴头，猴菇，是中国传统的名贵菜肴，肉嫩、味香、鲜美可口。猴头菇是一种食药用兼备的珍稀菌类,其子实体和发酵菌丝均可入药。随着人民生活水平的提高，猴头菇也进入了普通家庭，特别是“非典”以后，猴头菇的营养及药用价值更加被认识，猴头菇市场消费急增，广阔的市场需求使人工栽培迅速发展。

随着猴头菇产业的快速发展，对高产、抗逆的猴头菇种质资源需求愈加迫切。但由于猴头菇品种本身具有无性繁殖的遗传特性，使得在菌种市场上同种异名，异种同名、假种、劣种现象普遍存在，再加上菌种质量的退化现象，不仅极大地损害了猴头菇生产者和育种者的利益，也影响了猴头菇产业的持续健康发展。因此，建立起一套科学可靠、快速便捷的猴头菇品种鉴定体系至关需要。而我国目前对猴头菇品种质量的监督管理，主要依靠在生产层面制定的各项生产技术标准，而在菌种质量技术层面尚未取得关键性突破，特别是缺乏猴头菇良种的早期快速鉴别技术体系。

就全国范围内来看，目前猴头菇主栽品种为15个，包括猴杰2号、猴头菇99、猴头菇G2M5.496、猴头菇G2M5.497、猴头菇920、猴头菇911、猴头菇99-1、猴头菇H6、猴王、大猴头、猴头6号、常山猴头菇、猴头BJ-5、福建猴头菇、猴头菇19号。对这些猴头菇品种的鉴别主要依据猴头菇菌丝、菌落和子实体形态的宏观现察、生长特性、生理生化反应以及不同菌株间发生的拮抗反应等，但由于这些方法易受环境因素和生理状况的影响，并且随着品种数量不断增多，使得品种鉴定愈来愈困难。

自本世纪以来，一些基于PCR的分子标记技术如RAPD(Random AmplifiedPolymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat，简单序列重复区间扩增多态性)和SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism，相关序列扩增多态性)相继用于了猴头菇的种质资源遗传多样性、遗传距离研究，但对于分子标记与猴头菇性状的连锁、猴头菇品种间的分子鉴别研究很少。况且，这些分子标记技术所采用的均为共有引物，其PCR扩增图谱不仅复杂、重复性差，而且特异性不高，因此并不适合用于品种鉴别，只有开发出某个品种稳定、特异的DNA指纹标记才能真正用于该猴头菇品种的准确快速鉴定。

CN101985657A公开了一种利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种猴王的方法，包括菌丝培养与收集，基因组DNA的提取，SCAR-PCR分子标记的检测建立和SCAR-PCR产物的检测。使用此发明公开的分子特异性引物猴王F2/R2检测引物进行PCR扩增，猴头菇菌种猴王的特征扩增产物为371bp。CN101402994A公开了一种利用分子标记技术鉴定猴头菇菌种猴杰的方法，具体步骤与CN101985657A中类似，使用此发明公开的分子特异性引物进行PCR扩增，猴头菇菌种猴杰的特征扩增产物为414bp。

发明内容

本发明提供了一种鉴定猴头菇猴杰2号或大猴头的引物对，该引物特异性高，利用该引物进行PCR鉴定，操作简便，准确性高。

引物对，包括上游引物和下游引物：

上游引物为：5′-ATTAGCTTGACGTACAGACAGTCG-3′，