[发明专利]以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法在审
| 申请号： | 201610083241.6 | 申请日： | 2016-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN105586335A | 公开（公告）日： | 2016-05-18 |
| 发明（设计）人： | 徐学明;鲁隼;冯俊清 | 申请（专利权）人： | 广州复能基因有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘宇峰 |
| 地址： | 510663 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mir 155 模板 制备 rna 探针 方法 | ||
1.一种以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法，其特征在于，包括以 下步骤：
A.针对miR-155前体序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物 为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；
B.从miR-155前体cDNA质粒中，采用步骤A的所述引物，通过PCR扩 增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；
C.加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物， 纯化后得到RNA探针。
2.根据权利要求1所述的以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是T7RNA聚合酶，引物的5'端加上T7启动子序 列。
3.根据权利要求1所述的以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是SP6RNA聚合酶，引物的5'端分别加上SP6启 动子序列。
4.根据权利要求1所述的以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是T3RNA聚合酶，引物的5'端分别加上T3启动 子序列。
5.根据权利要求1所述的以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法，其 特征在于，所述RNA聚合酶是TrcRNA聚合酶，引物的5'端分别加上Trc启动 子序列。
6.一种快速检测胰腺癌相关的miR-155表达的试剂盒，其特征在于：包括 根据权利要求1所述的方法所制备的RNA探针。
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