[发明专利]一种检测单分子DNA复制的图像可视化方法

权利要求书

1.一种检测单分子DNA复制的图象可视化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：对含有dNTP、两端分别固定于空心DNA折纸上两个不同位置的单链DNA及结合所述单链DNA的DNA聚合酶Klenow片段的缓冲体系进行原子力显微镜扫描，通过所述原子力显微镜成像观察DNA的复制。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述空心DNA折纸为等边三角形。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述空心DNA折纸由单链脚手架链DNA和订书钉单链DNA自组装形成，订书钉单链用于固定脚手架链形成目标图形。

4.如权利要求3所述方法，其特征在于，所述单链脚手架链DNA为M13mp18，所述订书钉单链DNA的核苷酸序列为A17与C33两条链分别替换为序列表SEQIDNO.1与SEQIDNO.2所示序列的订书钉链DNA集合ABCL，所述订书钉链DNA集合ABCL为2010年3月17日发表在JAmChemSoc.第132卷第10期第3248-3249页的题为Goldnanoparticleself-similarchainstructureorganizedbyDNAorigami的论文的SupportinOnlineInformation中的S11-S16页所记载的从A01至Loop的DNA序列的集合；所述单链DNA的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.3所示。

5.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述单链DNA通过其5’端与其3’端分别与订书钉链SEQIDNO.1的5’端的20个碱基与订书钉链SEQIDNO.2的3’端的20个碱基杂交固定到所述DNA折纸上并位于所述DNA折纸中央。

6.如权利要求5所述方法，其特征在于，所述杂交为将所述单链DNA与所述空心DNA折纸混合后升温至50℃后以0.5℃/min的速率退火至15℃，再用TAE-Mg²⁺缓冲液超滤。

7.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述单链DNA的5’端与3’端分别固定在所述空心DNA折纸的外侧的同一边上的两个不同位置。

8.如权利要求7所述方法，其特征在于，所述单链DNA为所述空心DNA折纸中的一条边的外侧的单链脚手架DNA缺失配对的订书钉链后所形成的单链DNA。

9.如权利要求1所述方法，其特征在于，对所述缓冲体系进行原子力显微镜扫描包括以下步骤：

1)将所述单链DNA两端分别固定于所述空心DNA折纸上两个不同位置，制得单链DNA-空心DNA折纸；较佳地，在所述空心DNA折纸的内侧边缘的订书钉链序列中选择两个不同位置各多出一段核苷酸序列分别与所述单链DNA模板的5’端与3’端序列配对，使所述单链DNA模板通过5’端与3’端杂交固定到所述DNA折纸上并位于所述DNA折纸中央；所述空心DNA折纸较佳地由包括以下步骤的方法制得：将单链脚手架链DNAM13mp18与A17与C33两条链分别替换为序列表SEQIDNO.1与SEQIDNO.2所示序列的订书钉链DNA集合ABCL混合于TAE-Mg²⁺缓冲体系，从95℃退火至20℃，退火速率为0.1℃/10s，其中所述订书钉链DNA集合ABCL为2010年3月17日发表在JAmChemSoc.第132卷第10期第3248-3249页的题为Goldnanoparticleself-similarchainstructureorganizedbyDNAorigami的论文的SupportinOnlineInformation中的S11-S16页所记载的从A01至Loop的DNA序列的集合，所述单链脚手架链M13mp18与所述A17与C33两条链分别替换为序列表SEQIDNO.1与SEQIDNO.2所示序列的订书钉链DNA集合ABCL的摩尔浓度比为1∶10，所述TAE-Mg²⁺缓冲液为40mMTris-乙酸、1mMEDTA、12.5mMMgCl₂，pH8.0，所述单链DNA的核苷酸序列较佳地如序列表SEQIDNO.3所示；

2)将步骤1)所述单链DNA-空心DNA折纸滴加至新解离的云母上，吸附3-5分钟后，原子力显微镜成像；

3)在获取了步骤2)所述单链DNA-空心DNA折纸图像后，加入DNA聚合酶Klenow片段与dNTPs的混合液，同时在原子力显微镜下扫描成像。