[发明专利]一种马精液冷冻保存液及其配制方法

权利要求书

1.一种马精液冷冻保存液，其特征在于：由葡萄糖2.00g～2.40g、乳糖3.40g～4.00g、海藻糖0.60g～1.00g、谷胱甘肽0.061～0.092g、柠檬酸钠0.50g～0.70g、脱脂奶30mL～50mL、卵黄液2.5～4.5mL、青霉素5万～10万IU、链霉素5万～10万IU、甘油4.5～5.5mL和双蒸水配制成100mL马精液冷冻保存液。

2.根据权利要求1所述的马精液冷冻保存液，其特征在于：由葡萄糖2.20g、乳糖3.70g、海藻糖0.80g、谷胱甘肽0.077g、柠檬酸钠0.60g、脱脂奶40mL、卵黄液3.5mL、青霉素10万IU、链霉素10万IU、甘油4.5mL和双蒸水配制成100mL马精液冷冻保存液。

3.如权利要求1或2所述的马精液冷冻保存液的配制方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)配制脱脂奶：取新鲜马奶过滤后，100℃水浴灭菌10min，缓慢降温至室温后，置于4℃冷藏，随后离心去除上层脂质和下层沉淀，得到脱脂奶；

(2)配制基础液I：按量取葡萄糖、乳糖、海藻糖、谷胱甘肽、柠檬酸钠、脱脂奶、卵黄液、青霉素和链霉素，先将葡萄糖、乳糖、海藻糖、谷胱甘肽和柠檬酸钠放入无菌容器中，加入双蒸水溶解，定容至100mL，随后加入脱脂奶、卵黄液、青霉素和链霉素，室温搅拌即得基础液I；

(3)配制冷冻保存液：取基础液I 95.5mL～94.5mL和甘油4.5～5.5mL，在基础液I中加入甘油搅拌20min～40min，即得100mL冷冻保存液。

4.根据权利要求3所述的马精液冷冻保存液的配制方法，其特征在于：所述步骤(1)中，离心为：以2000～3000r/min转速离心20～30min。

5.根据权利要求3所述的马精液冷冻保存液的配制方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)配制脱脂奶：取脱脂奶粉加入双蒸水中，搅拌，配制成浓度为0.1g/mL溶液，得到脱脂奶；

(2)配制基础液I：按量取葡萄糖、乳糖、海藻糖、谷胱甘肽、柠檬酸钠、脱脂奶、卵黄液、青霉素和链霉素，先将葡萄糖、乳糖、海藻糖、谷胱甘肽和柠檬酸钠放入无菌容器中，加入双蒸水溶解，定容至100mL，随后加入脱脂奶、卵黄液、青霉素和链霉素，室温搅拌即得基础液I；

(3)配制冷冻保存液：取基础液I 95.5mL～94.5mL和甘油4.5～5.5mL，在基础液I中加入甘油搅拌20min～40min，即得冷冻保存液。

6.根据权利要求3或5所述的马精液冷冻保存液的配制方法，其特征在于：所述步骤(2)中，卵黄液通过以下步骤获取：取新鲜鸡蛋，去除蛋清后，把蛋黄膜刺透，卵黄液收集到用冰冷却的容器中。

7.根据权利要求3或5所述的马精液冷冻保存液的配制方法，其特征在于：所述步骤(2)中，室温搅拌20min～45min得到基础液I。

8.如权利要求1或2所述的马精液冷冻保存液在马精液冷冻保存中的应用，其特征在于：马精液冷冻保存方法包括以下步骤：取待保存的马精液，加入基础液I进行稀释，马精液与基础液I的体积比为1:1～2，其中，基础液I是由葡萄糖、乳糖、海藻糖、谷胱甘肽、柠檬酸钠、脱脂奶、卵黄液、青霉素、链霉素和双蒸水配制而成；随后在室温条件下，以600×g离心力离心8～12min，弃去上清液，再用冷冻保存液稀释至精子密度为5×10⁷～1×10⁸个/mL，混合均匀后，装入0.5mL细管中，缓慢降温至4℃平衡90～120min，再在距离液氮面上4～6cm处熏蒸8～10min后，投入液氮中保存。