[发明专利]一种马精液冷冻保存液及其配制方法

说明书

本发明公开了一种马精液冷冻保存液，由葡萄糖2.00g～2.40g、乳糖3.40g～4.00g、海藻糖0.60g～1.00g、谷胱甘肽0.061～0.092g、柠檬酸钠0.50g～0.70g、脱脂奶30mL～50mL、卵黄液2.5～4.5mL、青霉素5万～10万IU、链霉素5万～10万IU、甘油3.5～5.5mL和双蒸水配制成100mL马精液冷冻保存液。还公开了该冷冻保存液的配制方法。本发明提供的马精液冷冻保存液，能够有效提高马精液在冻存过程中的存活率和精子活力。解冻后精子生理指标高,现场应用受胎效果稳定可靠,可用于生产。制备方法步骤少、简单易操作，制备条件温和易控制。

技术领域

本发明涉及一种马精液冷冻保存液及其配制方法，属于动物精液冷冻保存技术领域。

背景技术

精液冷冻保存是马人工辅助繁殖技术手段之一。1950年，Smith和Polge最早将甘油作为抗冻剂应用到马精液冷冻保存。1957年，Barker和Gandier最早利用马附睾冷冻精液进行配种受孕。中国早在20世纪50年代末就开始进行有关马精液冷冻保存的研究，并取得了较好的成绩。20世纪80年代，随着阿拉伯马、夸特马、美国花马等品种登记组织允许使用冷冻精液配种出生的幼驹登记，使得马精液冷冻保存技术得到快速发展。马精液冷冻可扩大种公马配种范围，减少马生殖道疾病的传播，保护优良遗传资源，能够跨越种族间进行交配，对完善马的精液冷冻和人工授精配套技术，对于马业的发展、地方优良马品种保存、加快马品种改良等方面都具有重要的意义。

冷冻保存液是精子的保护剂，对精液冷冻的效果有决定性的影响。目前，国内马精液的冷冻技术还处于试验阶段，主要原因在于：(1)马精液冷冻过程中冷冻一解冻机理、精子损伤机理、外部环境变化对精子的影响、精子内部组成物质的变化规律及分子机制等诸多方面尚不完全清楚；(2)实际操作中的冷冻一解冻程序、稀释液和解冻液的组成不一致，配制成分、方法复杂，不便于生产中现场配制使用；(3)冷冻精液的活力也难以达到人工授精要求。以上问题严重制约了马冷冻精液在马育种及商品化生产中的应用。因此，研究一种马精液冷冻保存液，能够有效提高马精子冻存过程中的存活率和活力，便于冷冻一解冻程序操作使用，显得尤为必要。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种马精液冷冻保存液，能够有效提高马精液在冻存过程中的存活率和精子活力，该马精液冷冻保存液的制备方法简单易实现。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种马精液冷冻保存液，是由葡萄糖2.00g～2.40g、乳糖3.40g～4.00g、海藻糖0.60g～1.00g、谷胱甘肽0.061～0.092g、柠檬酸钠0.50g～0.70g、脱脂奶30mL～50mL、卵黄液2.5～4.5mL、青霉素5万～10万IU、链霉素5万～10万IU、甘油3.5～5.5mL和双蒸水配制成100mL马精液冷冻保存液。

进一步地，前述马精液冷冻保存液，是由葡萄糖2.20g、乳糖3.70g、海藻糖0.80g、谷胱甘肽0.077g、柠檬酸钠0.60g、脱脂奶40mL、卵黄液3.5mL、青霉素10万IU、链霉素10万IU、甘油4.5mL和双蒸水配制成100mL马精液冷冻保存液。

一种马精液冷冻保存液的配制方法，包括以下步骤：(1)配制脱脂奶；(2)配制基础液I；(3)配制冷冻保存液。

前述马精液冷冻保存液的配制方法，具体包括以下步骤：

(1)配制脱脂奶：取新鲜马奶过滤后，100℃水浴灭菌10min，缓慢降温至室温后，置于4℃冷藏(能够充分冷却，使脂质漂浮于上层即可)，随后离心去除上层脂质和下层沉淀，得到脱脂奶，其保存时间一般不超过三天；