[发明专利]提高植物转化效率的多个转化增强子序列的应用

权利要求书

1.提高根瘤菌介导的植物转化效率的方法，其包括如下步骤：

用根瘤菌转化植物细胞，所述根瘤菌包含植物转化载体，该植物转化载体含有至少一个T-DNA边界序列和与所述T-DNA边界序列可操作地连接的转化增强子序列；

其中所述转化增强子序列包含来自根瘤农杆菌的两个或更多个拷贝的超驱动(OD)序列。

2.权利要求1的方法，其中所述OD序列包含SEQIDNO:20或与SEQIDNO:20互补的序列的共有核心序列。

3.权利要求2的方法，其中所述OD序列包含选自以下的序列：SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、和与SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9中的任一个互补的序列。

4.权利要求1的方法，其中所述转化增强子序列位于T-DNA右边界(RB)序列的近端。

5.权利要求1的方法，其中所述OD序列来自根瘤农杆菌(A.tumefaciens)的胭脂碱或章鱼碱Ti质粒。

6.权利要求1的方法，其中所述根瘤菌介导的转化是农杆菌(Agrobacterium)、根瘤菌(Rhizobium)、中华根瘤菌(Sinorhizobium)、中间根瘤菌(Mesorhizobium)或慢生根瘤菌(Bradyrhizobium)介导的转化。

7.权利要求1的方法，其中所述根瘤菌介导的转化是农杆菌介导的转化。

8.权利要求1的方法，其中所述植物细胞来自选自以下的植物：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麦、苜蓿、菜豆、花生、烟草、向日葵、大麦、甜菜、青花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黄瓜、茄子、韭葱、莴苣、甜瓜、燕麦、洋葱、豌豆、胡椒、花生、马铃薯、西葫芦、萝卜、高粱、菠菜、南瓜、糖萝卜、西红柿和西瓜。

9.权利要求1的方法，其中所述转化增强子序列包含SEQIDNO:10或与SEQIDNO:10互补的序列。

10.权利要求1的方法，其中所述植物细胞是玉米或者大豆细胞。

11.权利要求1的方法，其中所述转化增强子序列包含2-约18个拷贝的所述OD序列。

12.权利要求1的方法，进一步包含以下步骤：

c)从所述植物细胞再生转基因植株。

13.包含T-DNA边界序列的重组DNA构建体，所述边界序列可操作地连接到转化增强子序列，该转化增强子序列包含选自以下序列的两个或更多个拷贝：SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、与SEQIDNO:7、SEQIDNO:8和SEQIDNO:9中的任一个互补的序列、及它们的组合。

14.权利要求13的构建体，其中所述增强子序列包含所述序列的至少约四个拷贝。

15.权利要求13的构建体，其中所述边界序列是右边界(RB)序列。

16.权利要求13的构建体，其中所述边界序列是左边界(LB)序列。

17.权利要求13的构建体，其中所述构建体包含SEQIDNO:10。

18.权利要求15的构建体，其中所述RB序列来自胭脂碱Ti质粒。

19.权利要求15的构建体，其中所述RB序列来自章鱼碱Ti质粒。

20.用权利要求13的构建体转化的转基因细胞。

21.权利要求20的细胞，限定为植物或者细菌细胞。

22.权利要求21的细胞，其中所述细胞是农杆菌细胞。

23.权利要求21的细胞，其中所述细胞是根瘤菌细胞。

24.权利要求21的细胞，其中植物细胞来自选自以下的植物：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麦、苜蓿、菜豆、花生、烟草、向日葵、大麦、甜菜、青花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黄瓜、茄子、韭葱、莴苣、甜瓜、燕麦、洋葱、豌豆、胡椒、花生、马铃薯、西葫芦、萝卜、高粱、菠菜、南瓜、糖萝卜、西红柿和西瓜。

25.用权利要求13的构建体转化的转基因植株。

26.权利要求25的转基因植株，限定为选自：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麦、苜蓿、菜豆、花生、烟草、向日葵、大麦、甜菜、青花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黄瓜、茄子、韭葱、莴苣、甜瓜、燕麦、洋葱、豌豆、胡椒、花生、马铃薯、西葫芦、萝卜、高粱、菠菜、南瓜、糖萝卜、西红柿和西瓜。