[发明专利]克百威生物条形码免疫分析测定试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种克百威生物条形码免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括盒体，所述盒体内包含有：

克百威标准品、克百威磁性纳米探针、单标胶体金纳米探针、克百威双标胶体金纳米探针、DNA生物芯片、银染试剂；

所述单标胶体金纳米探针由单链DNA1包被胶体金颗粒得到；所述胶体金颗粒的粒径为13～15nm；

所述克百威双标胶体金纳米探针由抗克百威抗体和双链DNA包被胶体金颗粒得到；所述抗克百威抗体为单克隆抗体；所述克百威双标胶体金纳米探针具体由以下方法制备得到：

1)、取胶体金溶液调pH至8.8～9.2后向其中加入抗克百威抗体，搅拌混合，静置25～35min；然后加入硫醇修饰的单链DNA链，8～12℃静置36～44h；再调整pH至7.3～7.5，在120～180min内分2～4次等量加入NaCl至浓度0.08～0.12mol/L，每次间隔40～60min，8000～11000r/min离心8～12min，弃上清，得到含寡核苷酸的胶体金；

2)、用牛血清白蛋白浓度为0.8～1.2％的磷酸盐缓冲液重悬所述含寡核苷酸的胶体金，孵育1～3h；再加入与所述硫醇修饰的单链DNA链互补的生物条形码DNA链，室温杂交3～5h，8000～11000r/min离心，弃上清，得到所述克百威双标胶体金纳米探针；

所述DNA生物芯片由单链DNA2点制得到；

所述双链DNA由硫醇修饰的单链DNA和条形码单链DNA互补配对而成；所述单链DNA1和单链DNA2与所述条形码单链DNA存在互补配对关系，且配对区域不重叠；

所述克百威磁性纳米探针由磁性纳米粒子和克百威完全抗原偶联而成；所述克百威完全抗原由克百威和载体蛋白偶联而成；所述载体蛋白为鸡卵白蛋白；所述磁性纳米粒子的粒径为18～22nm。

2.权利要求1所述的克百威生物条形码免疫分析测定试剂盒在克百威定性定量分析中的应用。

3.权利要求1所述的克百威生物条形码免疫分析测定试剂盒测定克百威的方法，其特征在于，包括：

a)、将克百威标准品、提取与净化后的待测样品分别与等体积的克百威双标胶体金探针和克百威磁性纳米探针混合孵育；

b)、洗涤孵育产物并去杂化得到与各标准品与待测样品对应的生物条形码；

c)、将所述生物条形码与DNA生物芯片杂交，并加入单标纳米金探针放大信号；杂交反应结束后加入银染试剂并用芯片扫描测定仪测定各孔灰度值；

d)、以克百威标准品的浓度为横坐标，各浓度所对应的灰度抑制率为纵坐标，建立标准曲线，并根据标准曲线计算各样品中的克百威浓度。