[发明专利]一种胃癌基因工程疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及基因工程疫苗，具体涉及一种新型的胃癌基因工程疫苗及其制备方法。

背景技术

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。目前胃癌的治疗手段主要有手术切除和化疗，但均不能有效解决肿瘤转移、复发等问题。近年来，肿瘤疫苗的研究给胃癌的防治带来了希望。但是因为缺乏高效、特异的胃癌特异性抗原或胃癌相关抗原，使胃癌疫苗的研制发展缓慢。

肿瘤疫苗主要包括如下五种：

一、肿瘤细胞疫苗

传统的瘤苗是通过自体或同种异体肿瘤细胞或其粗提物，经过物理、化学或生物方法处理后，抑制其生长能力，保持并增强其免疫原性。但这种疫苗的免疫原性弱，难以引起免疫应答。后来，将肿瘤细胞加入佐剂如卡介苗(BCG)、短小棒状杆菌或弗氏佐剂等以增强其免疫原性，但效果仍不理想。而且这种疫苗制备耗时较长，不能满足快速免疫的需要。近年来对全细胞瘤苗进行了改进，已尝试用建株的的肿瘤细胞系作为其替代物。动物实验证实，使用处理过的建株肿瘤细胞作为全细胞瘤苗具有以下优点：(a)肿瘤细胞表达多种抗原，避免了分离、鉴定抗原的烦琐；(b)用作疫苗的肿瘤细胞表达的MHC可以与患者不匹配，可作为同种异体抗原，激发免疫应答；(c)用建株肿瘤细胞制备疫苗，简单易行，大大缩短了患者从确诊到接种疫苗的时间。

二、肿瘤基因工程疫苗

肿瘤基因工程疫苗是一种通过基因重组技术将目的基因导入受体细胞而制备的疫苗。随着免疫基础理论的发展，各种疫苗的研制也日新月异。国内外学者己将不同的目的基因导入受体细胞，提高其免疫原性或活化效应细胞的能力。这种疫苗主要从以下几个方面来实现其抗瘤效应：(a)提高机体抗瘤能力；(b)增强肿瘤免疫原性；(c)基因产物直接杀伤瘤细胞。近几年有关肿瘤基因工程疫苗研究的热点主要集中在GM-CSF基因疫苗、多基因联合修饰疫苗、基因修饰树突状细胞和构建树突状细胞疫苗，以及免疫修饰基因与自杀基因的联合。如将B7-l和IL-4，B7-l和IL-7，IFN-Y、GM-CSF和B7-l，IL-12、B7-l和肿瘤抗原等多细胞因子基因进行联合修饰。多种细胞因子与自杀基因的联合转染能扬长避短相互协同，具有更好的免疫效应。

三、树突状细胞(DC)疫苗

目前用肿瘤抗原肽、肿瘤细胞裂解物、肿瘤细胞RNA体外冲击DC或将TAA基因转入DC内，均被认为是颇有前途的瘤苗制备方案。但各种体外冲击手段均有半衰期短的缺点，若要诱导出高水平的持久的抗肿瘤免疫反应，需反复多次体内回输致敏DC。另外一种用肿瘤cDNA或mRNA体外冲击DC的方法可以解决抗原丢失或抗原变异的问题，而且又避免了分离大量肿瘤抗原肽的困难。现代分子生物学技术己可以较容易地大量扩增肿瘤mRNA及构建肿瘤的cDNA文库，这为我们提供了庞大的肿瘤抗原库，也为应用cDNA、mRNA体外冲击DC细胞提供了原料。体外用肿瘤cDNA或mRNA冲击DC细胞无须确定肿瘤抗原，而且理论上讲冲击后的DC细胞可以表达任何一种可能的肿瘤相关抗原，因而被一些研究采用并取得了良好的效果。

四、肽疫苗

抗原提呈过程和免疫识别的研究，己证实肿瘤抗原须在APC胞内降解为短肽，最后形成肽-MHC-TCR复合物才能为T细胞识别，并激发CTL反应，这为肽疫苗的研究提供了理论依据。所用肿瘤抗原多肽可分为两类：人工合成多肽和自然源性多肽。合成多肽疫苗是随着肿瘤抗原表位的确定发展起来的。根据肿瘤抗原表位合成相应的多肽，然后与佐剂一起或单独免疫，可以诱导针对免疫原性表位的抗肿瘤免疫反应。合成多肽疫苗的优点在于：诱导免疫反应的特异性较高；可以大量合成；抗原纯度高；对各种组织型应用广泛；仅需要少量的病人肿瘤组织(用于确定抗原的表达)；可以激活CD+4T和CD+ST细胞。合成肽疫苗的这些优点使之成为一种重要的的疫苗策略。

五、核酸疫苗

核酸疫苗是由能引起保护性免疫反应的抗原基因片段及其载体构建而成。包括DNA疫苗和RNA疫苗，目前研究最多的是DNA疫苗。与其他疫苗相比，DNA疫苗具有许多优点：接种基因可以长期表达，诱导的免疫反应持久高效；制备简单，容易构建，经济省时；与重组蛋白相比，基因疫苗更接近于自然感染状态；免疫反应强烈，特异，广泛，全面，且能够产生交叉免疫保护；核酸疫苗能同时激发机体细胞免疫和体液免疫反应，能诱导许多亚单位疫苗所不能诱导的CTL效应；稳定性好，容易保存；可以诱导不成熟免疫系统产生T细胞免疫应答；无感染复制危险，不会产生回复突变；可用同一载体制备针对多种疾病的基因疫苗，研制多价疫苗。