[发明专利]一种致敏NK细胞的方法及组合物有效
| 申请号： | 201610088091.8 | 申请日： | 2016-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN105505872B | 公开（公告）日： | 2019-01-15 |
| 发明（设计）人： | 葛啸虎;陈海佳;王一飞;万桦;张维敏 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12N1/38 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 刘雪花 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单抗 致敏 实体瘤细胞 抗原 刺激 免疫细胞 杀伤活性 杀伤能力 肿瘤细胞 悬液 原性 肿瘤 分化 对抗 | ||
1.一种致敏NK细胞的组合物，其特征在于，由实体瘤细胞抗原、CD28单抗、CD137单抗和桔红素组成，各组分的浓度如下：
其中，所述实体瘤细胞抗原为胃癌细胞抗原或肠癌细胞抗原。
2.根据权利要求1所述的致敏NK细胞的组合物，其特征在于，各组分的浓度如下：
3.根据权利要求2所述的致敏NK细胞的组合物，其特征在于，各组分的浓度如下：
4.一种致敏NK细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
使用权利要求1-3中任一项所述的致敏NK细胞的组合物致敏NK细胞，向NK细胞悬液中加入CD28单抗和实体瘤细胞抗原，在5％CO2、37℃中培养24小时，再加入CD137单抗和桔红素，继续在5％CO2、37℃中培养24小时；
所述实体瘤细胞抗原为MKN45胃癌细胞或HT29结肠癌细胞抗原。
5.根据权利要求4所述的致敏NK细胞的方法，其特征在于，所述实体瘤细胞抗原通过以下方法制备：用5ml生理盐水重悬1×106个实体瘤细胞，加入冻存管中，放到液氮中冷冻，待细胞悬液完全凝结后取出，室温解冻至完全融化，重复冷冻解冻过程至细胞完全裂解，最后一次解冻所获得的液体离心去除沉淀，所得上清即为实体瘤细胞抗原。
6.根据权利要求4所述的致敏NK细胞的方法，其特征在于，所述NK细胞通过以下方法制备：用Ficoll分离液法分离单个核细胞，用含20-80ng/ml的IL-2和20-80ng/ml的IL-15的X-VIVO 15培养基培养，每3天补液一次，培养至第14天。
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