[发明专利]一种致敏NK细胞的方法及组合物

说明书

本发明公开了一种致敏NK细胞的方法及组合物。所述致敏NK细胞的组合物包含实体瘤细胞抗原、CD28单抗、CD137单抗和桔红素。所述致敏NK细胞的方法，包括以下步骤：向NK细胞悬液中加入CD28单抗和实体瘤细胞抗原，在5％CO₂、37℃中培养24小时，再加入CD137单抗和桔红素，继续在5％CO₂、37℃中培养24小时。通过本发明致敏的NK细胞，对于肿瘤细胞的杀伤活性强，对抗原性较弱的肿瘤同样具有较强的杀伤能力。本发明致敏NK细胞分为两步进行刺激，先加入CD28单抗和实体瘤细胞抗原，以刺激NK细胞的识别功能，后加入CD137单抗和桔红素，再刺激免疫细胞向NK细胞分化。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种致敏NK细胞的方法及组合物。

背景技术

NK细胞又叫自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)，是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。NK细胞主要分布于外周血中，占PBMC的5～10％。NK细胞的杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体，因此称为自然杀伤活性。NK细胞作用于靶细胞后杀伤作用出现早，在体外1小时、体内4小时即可见到杀伤效应。NK细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞(包括部分细胞系)、病毒感染细胞、某些自身组织细胞(如血细胞)、寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素。

NK细胞在免疫细胞治疗中发挥了重要作用，但是在某些肿瘤疾病当中，由于肿瘤细胞免疫原性较弱、且能分泌免疫抑制因子促使细胞凋亡或者降低杀伤活性，导致NK细胞杀伤活性较差。现有技术通过加入该类肿瘤细胞抗原以达到刺激NK细胞增殖和增强杀伤活性的目的。这种方法对于血液性肿瘤的疗效不错；但对胃癌和肠癌等抗原性较弱并且存在免疫逃逸的实体瘤，采用胃癌或肠癌细胞抗原刺激的NK细胞对实体肿瘤杀伤效果较差。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种致敏NK细胞的方法及组合物。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种致敏NK细胞的组合物，包含实体瘤细胞抗原、CD28单抗、CD137单抗和桔红素。实体瘤细胞抗原可以刺激NK细胞的扩增，还能够使其识别特定种类的肿瘤细胞；CD28单抗可以增强NK细胞对肿瘤抗原的摄取能力，从而提高肿瘤抗原的致敏效果；桔红素可以巩固NK细胞对抗原的识别能力，同时避免NK细胞的自主凋亡；CD137单抗刺激NK细胞成熟和细胞因子的分泌。

优选地，所述致敏NK细胞的组合物各组分的浓度如下：

优选地，所述致敏NK细胞的组合物各组分的浓度如下：

优选地，所述致敏NK细胞的组合物中各组分的浓度如下：

一种致敏NK细胞的方法，包括以下步骤：

向NK细胞悬液中加入CD28单抗和实体瘤细胞抗原，在5％CO₂、37℃中培养24小时，再加入CD137单抗和桔红素，继续在5％CO₂、37℃中培养24小时。本发明致敏NK细胞的方法，先加入CD28单抗和实体瘤细胞抗原，以刺激NK细胞的识别功能，后加入CD137单抗和桔红素，再刺激免疫细胞向NK细胞分化，分为两步进行刺激，效率较高。

优选地，所述实体瘤细胞抗原通过以下方法制备：用5ml生理盐水重悬1×10⁶个实体瘤细胞，加入冻存管中，放到液氮中冷冻，待细胞悬液完全凝结后取出，室温解冻至完全融化，重复冷冻解冻过程至细胞完全裂解，最后一次解冻所获得的液体离心去除沉淀，所得上清即为实体瘤细胞抗原。