[发明专利]一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的方法

权利要求书

1.一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的方法，其特征在于：包 括以下步骤：

步骤一、取当年生油桐成熟种子经初步消毒后，于超净工作台中进行表面 消毒；

步骤二、将步骤一消毒后的种子，取胚接种于萌发培养基中进行萌发；

步骤三、将萌发25～30d的无菌苗下胚轴切成适宜大小的切段，接种到不 定芽诱导培养基中，经过25～30d的光照培养,下胚轴的两端诱导出不定芽；

步骤四、将带有不定芽丛的下胚轴转接于增殖培养基中进行芽的增殖；

步骤五、培养15～20d后转至不定芽伸长培养基上进行芽的伸长培养；

步骤六、待芽长至2～4cm，转至生根培养基中进行生根；

步骤七、待幼苗长至2～4cm并带有2～4片真叶时，进行炼苗并移栽，获 得健壮的油桐植株再生。

2.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤一中的表面消毒是指选取优质的种子，剥去种 壳用流水冲洗15～30min，期间添加2～4ml洗涤剂，在超净台用无菌水洗3次 后在75％酒精中浸泡60s～120s，再用0.1％HgCl₂处理3～6min，期间不停晃动 瓶子，然后用无菌水冲洗4～5次，充分洗掉残余的消毒液，消毒完后，将种子 放入无菌水中浸泡2-6h。

3.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤二中油桐种子胚的获取是指将消毒后的种子， 用镊子和手术刀去除胚乳，获得完整的胚，并将胚进行萌发获得无菌苗。

4.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的下胚轴适宜大小的切段是指将步骤二中获得的无菌 苗下胚轴切成0.3～0.6cm大小；所述的步骤三中的切段接种于不定芽诱导培养 基中的方式为水平接种于不定芽诱导培养基中。

5.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤三中不定芽诱导培养基为：MS+0.5～ 5.0mg/L6-BA+0.05～0.2mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH＝5.8。

6.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤四中不定芽的增殖培养基为：MS+0.5～ 4.0mg/L6-BA+0.02～0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH＝5.8。

7.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤五中不定芽的伸长培养基为：MS+0.5～ 4.0mg/L6-BA+0.02～0.1mg/LIBA+0.5～2.0mg/LGA₃+30g/L蔗糖+7g/L琼脂， pH＝5.8。

8.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤六中伸长芽的生根培养基为：1/2MS+0.05～ 1.0mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH＝5.8。

9.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生的 方法，其特征在于，所述的步骤七中的驯化和移栽的具体过程是指：将生根后 的幼苗在湿度为70～80％的人工气候箱中炼苗3～5d，从培养瓶中取出，洗净根 部的培养基，移栽到营养土：珍珠岩：蛭石为2：1：1的混合基质中，并用保 鲜膜覆盖保湿一周后揭开放在温室中培养。

10.根据权利要求1所述一种利用油桐下胚轴为外植体直接诱导植株再生 的方法其特征在于，所述方法中培养条件为温度25±2℃，光照2000～2500lx， 光照时间14～16h/d。