[发明专利]小鼠细小病毒定量PCR检测方法及其引物与探针在审
| 申请号： | 201610091937.3 | 申请日： | 2016-02-19 |
| 公开（公告）号： | CN105506187A | 公开（公告）日： | 2016-04-20 |
| 发明（设计）人： | 钱学敏;姜东秀;刘大钧 | 申请（专利权）人： | 苏州药明康德检测检验有限责任公司;无锡药明康德生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 丁纪铁 |
| 地址： | 215104 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小鼠 细小 病毒 定量 pcr 检测 方法 及其 引物 探针 | ||
1.小鼠细小病毒的定量PCR检测方法，其特征在于，步骤包括：
1)提取待测样品DNA；
2)制备包含Mastermix、正向引物、反向引物和探针的PCR反应液；
3)梯度稀释标准品；
4)试剂的阴性对照、待测样品的阴性对照以及加入了标准品的待测样品上样；
5)PCR反应。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)，待测样品DNA模板的浓度为0.1 μg/μL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)，5个以上十倍梯度稀释标准品。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3)，标准品浓度范围为10～105拷贝。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)，PCR反应体系为25微升，引物 的终浓度为100nM，探针的终浓度为250nM。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)，PCR反应条件为：50℃2分钟； 95℃10分钟；95℃15秒，60℃1分钟，45个循环。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正向引物具有如SEQIDNO.1所示的 序列或其互补序列，所述反向引物具有如SEQIDNO.2所示的序列或其互补序列，所述探针 具有如SEQIDNO.3所示的序列或其互补序列。
8.用于小鼠细小病毒定量PCR检测方法的引物对，其特征在于，包括正向引物和反向引 物，所述正向引物具有如SEQIDNO.1所示的序列或其互补序列，所述反向引物具有如SEQID NO.2所示的序列或其互补序列。
9.用于小鼠细小病毒定量PCR检测方法的探针，其特征在于，所述探针具有如SEQIDNO.3 所示的序列或其互补序列。
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