[发明专利]一种植物根际促生菌对植物促生效能的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业微生物领域，具体涉及一种植物根际促生菌对植物促生效能的测定方法。

背景技术

植物根际促生菌(plantgrowthpromotingrhizobacteria，简称促生菌或PGPR)是指自由生活在土壤或附生于植物根际、茎叶，可促进植物生长及对矿质营养吸收和利用，产生促进植物生长代谢物，抑制有害微生物繁殖的一类细菌的总称。在农业生产中引入植物根际促生菌，对创造良好的根际生态环境、降低化肥与农药的使用、抑制病虫害的发生有重要的作用，在保证现代农业可持续发展的同时又达到增产的目的。因此，筛选出促生效能好的菌株对提高植物产量有着重要意义。

近年来，国内外很多学者对植物根围促生菌的生理效应、作用机制、制剂产品和应用进行了多方面的研究。目前，应用方面最普遍的做法是从植物根际分离筛选大量高效优良的植物根际促生菌菌株，并测定其促生效能，再筛选促生效能好的菌株研制微生物肥料，将植物根际促生菌真正运用到大田中。在筛选菌株测定促生效能时，本发明提供的方法操作简单方便、能较为准确的测定菌株对植物生长特性及品质的影响。

发明内容

本发明的目的为提供一种操作简单方便、测定结果较为准确的植物根际促生菌对植物促生效能的测定方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术手段：

一种植物根际促生菌对植物促生效能的测定方法，包括以下步骤：

（1）培养基的制备

在Hoagland营养液的基础上添加一定量的琼脂，制备Hoagland半固体培养基；制备LB培养基；

（2）接种剂的制备

接种PGPR菌株于LB液体培养基中，于28℃，125r/min培养48h，用无菌水调节菌株菌悬液浓度为1×10⁸cfu/mL；在三角瓶内装入150mLLB液体培养基，灭菌后置于室温下1-2d，经检查无污染后接种20mL上述菌悬液，于28℃，125r/min培养2-3d，用灭菌量筒将菌液注入灭菌玻璃瓶中常温密封保存备用；

（3）植物种子的催芽

选择籽粒饱满的植物种子，经0.1%HgCl₂表面消毒2-3min，再用无菌水冲洗3-5次后，置于盛有水琼脂培养基的培养皿中，放入25℃的培养箱中培养，待种子萌发至1-2cm后备用；

（4）种植

将步骤（3）中萌发至1-2cm的幼苗移至盛有40ml灭菌的Hoagland半固体培养基的长玻璃试管中，每个试管种植1株幼苗，放入智能人工气候培养箱中（28℃，16h光照，20000lx，8h黑暗，相对湿度40%-50%）2d后选择成功生长，长势一致的幼苗；

（5）接菌

取步骤（2）中制备的接种剂1ml在无菌条件下分别接种于步骤（4）中选择的幼苗，设不接菌对照处理，每个处理均重复3次，幼苗试管置于智能人工气候培养箱中继续培养。

（6）收获及指标的测定

接种菌株的幼苗培养数天（可按试验需要设定）后收获，测定植物的生物量、根系生长的特征、植物的品质等内容，分析判断菌株的促生效能。

其中，步骤（1）中所述Hoagland半固体培养基可以为Hoagland半固体难溶磷培养基或者Hoagland半固体无氮培养基。

采用本发明的测定方法，测定的PGPR菌株可为已知菌株，也可为未知菌株。若为已知菌株，可测定这种菌株的促生效能及促生机理；若为未知菌株，可通过此方法筛选促生效能优良的菌株资源，然后再进一步鉴定。所以无论采用哪种PGPR菌种均可达到本发明的目的和效果。

具体实施方式

以下实施例用以对本发明进行详细说明，并不用于限定本发明。

实施例1

供试溶磷菌株为PYXP1、PYXP13、PWXP8、PYXZ1、PYXZ7、PYXZ19、PYXZ23、PWXZ6、PWXZ10、NXY18、NXZ4、NXZ8、NXZ17、NXZ18、003PWXZ6、003NXZ4、003NXZ9。

供试植物为披碱草（Elymusdahuricus），发芽率为95%。

一种植物根际促生菌（PGPR）对植物促生效能的测定方法，包括以下步骤：

（1）培养基的制备