[发明专利]一种检测人类白细胞抗原HLA-G的方法

权利要求书

1.人类白细胞抗原-G 酶联免疫试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

抗HLA-G单克隆抗体3C4，

生物素标记的抗β2-微球蛋白单抗3H1，

其制备方法为：将10ug/mL抗HLA-G单克隆抗体3C4用标准方法包被在96孔酶标板或12×8或8×12酶标条上；将血浆或血清或细胞培养液中的可溶性HLA-G蛋白和3C4抗体结合；再采用生物素标记的抗β2-微球蛋白单抗3H1对被3C4抗体结合的HLA-G蛋白进行夹心式结合；然后用Streptoavidin-HRP 复合物结合生物素标记的抗β2-微球蛋白单抗3H1，再采用辣根过氧化酶催化色原底物TMB显色，根据标准曲线确定检测样品中HLA-G 的浓度；

其中，抗HLA-G单克隆抗体3C4采用HLA-G的重链的第85-185位氨基酸序列的蛋白片段作为抗原制备单克隆抗体3C4，

抗β2-微球蛋白单抗3H1采用HLA-G的轻链的第1-50为氨基酸序列的蛋白片段偶联KLH后作为抗原制备单克隆抗体3H1，

所述HLA-G的重链的第85-185位氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HLA-G的轻链的第1-50为氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的一种人类白细胞抗原-G 酶联免疫试剂盒，其特征在于，制备抗HLA-G单克隆抗体3C4的方法如下：

（1）采用重组蛋白的方法获得HLA-G的重链的第85-185位氨基酸序列的蛋白片段；

（2）将步骤（1）获得的蛋白片段作为抗原免疫小鼠，然后经细胞融合、筛选杂交瘤细胞得到抗体3C4。

3.根据权利要求1所述的一种人类白细胞抗原-G 酶联免疫试剂盒，其特征在于，制备抗β2-微球蛋白单抗3H1的方法如下：

（1）合成HLA-G的轻链的第1-50为氨基酸序列的蛋白片段并偶联KLH；

（2）将步骤（a）偶联KLH后的蛋白片段作为抗原免疫小鼠，然后经细胞融合、筛选杂交瘤细胞得到抗体3H1。