[发明专利]一种检测人类白细胞抗原HLA-G的方法

说明书

本发明公开了一种检测人类白细胞抗原HLA‑G的方法，采用HLA‑G的重链的第85‑185位氨基酸序列的蛋白片段作为抗原制备抗体3C4，采用HLA‑G的轻链的第1‑50为氨基酸序列的蛋白片段偶联KLH后作为抗原制备抗体3H1，然后将3C4和3H1作为酶联免疫检测试剂来检测HLA‑G，所述HLA‑G的重链的第85‑185位氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，HLA‑G的轻链的第1‑50为氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的方法具有检测灵敏度高、特异性好，具有很好的可重复性和准确性，从而为检测HLA‑G提供了一种新的方法。

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及一种检测血清可溶性人类白细胞抗原G的方法。

背景技术

先兆子痫(preeclampsia，PE)是指在妊娠24周左右，在高血压、蛋白尿基础上，出现头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状，又称妊娠高血压综合征。是妊娠期特有疾病，产科四大重症之一。其发病率约为5-10％。严重危及母婴安全。对先兆子痫的早期筛查有助减少对母婴危害。

先兆子痫发病机理至今仍不是完全清楚。但是，现今医学界公认胎盘不正常植入和不正常发育是先兆子痫的主要病因。因为分娩后，胎盘排除，先兆子痫的症状即可消失。

胎盘不正常植入和不正常发育则与母亲的免疫功能相关。因为胎儿基因的一半来自母亲，一半来自父亲。对母体免疫系统来讲，胎儿是一个同种、半异体。但在成功的妊娠，母亲免疫系统并没有将其排斥清除。这种现象称之为母体对胎儿的免疫耐受。如果这种免疫耐受机制失调，即可引起母亲的免疫排斥反应增强而导致胎盘着床浅，胎盘的滋养叶细胞功能受损，胎盘缺血和胎盘代谢障碍。同时，胎盘源性血浆细胞毒性因子增加，从而使血管内皮细胞损伤，全身小动脉痉挛，最终导致妊娠高血压综合征(Goldman-Wohl D,etal.Mol.Hum.Reprod.2000；6:88-95)。

人类白细胞G(HLA-G)是一种非经典的人类白细胞I类抗原(Geraghty DE et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.1987；84:9145-149)。HLA-G的基因同经典I类白细胞抗原的基因(HLA-A，-B和-C)均位于第6对染色体的短臂上；基因和表达的产物与经典I类白细胞抗原有86％雷同。但是，HLA-G与经典I类白细胞抗原相比，在正常生理情况下，HLA-G仅在胎盘的绒毛膜滋养细胞有较高的表达(Kovats et al.,Science 1990；248:220)。而HLA-A,-B和-C在所有的有核细胞均有表达，但在胎盘的绒毛膜细胞经典I类白细胞抗原表达则是缺失的。组织和细胞缺乏或降低经典I类白细胞抗原的表达，可以降低抗原提呈功能和免受细胞毒性T淋巴细胞(CTL)攻击，但极容易受到自然杀伤细胞(NK)的攻击。HLA-G则具有抑制自然杀伤细胞，细胞毒性T淋巴细胞和抗原提呈细胞(APC)的功能(LeMaoult J et al.,TissueAntigens.2003；62:273)。因此，胎盘绒毛膜细胞经典I类白细胞抗原的表达的缺失和HLA-G的高表达构成了母体对胎儿免疫耐受关键的环节。

已有大量的研究证明先兆子痫患者的胎盘HLA-G mRNA和蛋白、以及血清中可溶性HLA-G蛋白表达明显降低(Yie SM et al.,Am.J.Obster.Gynecol.191:525-529,2004)。O'Brin等人研究结果显示：先兆子痫患者HLA-G在胎盘绒毛外细胞滋养细胞簇上呈孤岛样缺失(O'B rien M et al.，Hum.Immunol.61:1126-1131，2000)。由于滋养细胞表达的HLA-G分子在细胞侵入母胎蜕膜中起到保护作用，HLA-G表达的缺陷，使绒毛滋养细胞易受母体免疫系统的攻击，让其侵蚀能力低下，侵入底蜕膜中的滋养细胞数量明显不足，侵蚀仅达子宫螺旋动脉蜕膜段，不能有效地完成血管重建(Hunt JS,et a1.，Hum.Reprod.9:729-735，2003)。与正常妊娠相比，先兆子痫患者的胎盘种植较浅，血管内皮细胞受损和功能发生异常。