[发明专利]一种从血浆Cohn法组分IV沉淀中提取抗凝血酶III和多种功能蛋白的方法有效

申请号：	201610098659.4	申请日：	2016-02-23
公开（公告）号：	CN105669858B	公开（公告）日：	2019-07-26
发明（设计）人：	梁凌宇;蒋琳;郭玉婷;杨军	申请（专利权）人：	兰州生物制品研究所有限责任公司
主分类号：	C07K14/81	分类号：	C07K14/81;C07K14/765;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16
代理公司：	北京知联天下知识产权代理事务所(普通合伙) 11594	代理人：	王冲;吴鑫
地址：	730046 甘***	国省代码：	甘肃;62
权利要求书：	查看更多	说明书：	查看更多
摘要：
搜索关键词：	一种血浆 cohn 组分 iv 沉淀提取抗凝 iii 多种功能蛋白方法
钻瓜网技术展会专利词库专利权人专利榜在售专利公布日期热门专利

【权利要求书】：

1.一种从血浆Cohn法组分IV沉淀中同时提取多种功能蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)沉淀溶解：取Cohn法组份IV沉淀溶解于5-12倍体积的pH6-8.5的缓冲液中，搅拌，过滤，得到滤过液；

(b)S/D病毒灭活：采用终浓度为1％Tween-80/0.3％TNBP进行病毒灭活，24±1℃条件下搅拌孵育6h，用HCl调至pH6-7.5；

(c)阴离子交换层析去除杂蛋白：用pH6-7.5的PB缓冲液平衡DEAE阴离子交换层析柱3-6个柱体积后上样，用pH6-8.5的缓冲液洗柱2-5个柱体积，用pH6-8.5的高盐缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；

(d)亲和层析吸附目的蛋白：将AAT Select亲和柱和肝素亲和柱进行串联连接，用含0.1-0.5M NaCl的pH6-8.5的缓冲液平衡层析柱2-6个柱体积；将步骤(c)的洗脱液上样串联的层析柱，用含有0.1-0.5M NaCl的pH6-8.5的缓冲液洗柱2-5个柱体积，收集串联层析柱的流穿液；

将两根串联的层析柱分离；

(e)抗凝血酶III产品制备：

步骤(d)的中的肝素亲和柱用pH6-8.5并含有10-500mmol/L柠檬酸和0.5-2mol/L NaCl的缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；

用pH6-8.5并含有10-500mmol/L柠檬酸和0.5-2mol/L NaCl的缓冲液平衡疏水层析柱2-6个柱体积后，上样肝素亲和柱洗脱液，收集上样后的流穿液；

将疏水层析柱的流穿液脱盐、浓缩、膜过滤除病毒、除菌分装、冻干，得到抗凝血酶III制品；

(f)α1-抗胰蛋白酶产品制备：

将步骤(d)的AAT Select亲和柱用pH6-8.5并含有1-2mol/L MgCl₂的缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；

用pH6.5-7.8的缓冲液平衡分子阻排层析柱后，上样AAT Select亲和柱洗脱液，收集α1-抗胰蛋白酶；

浓缩、分装、冻干，对冻干制品进行80℃、72小时干热病毒灭活，得到α1-抗胰蛋白酶制品；

(g)白蛋白制备：

步骤(d)中的流穿液经G25脱盐后转换于pH3-5.5的缓冲液中，然后上样CM阳离子交换层析柱，流穿液继续上样Superdex 200层析柱，收集白蛋白组分，浓缩、巴氏灭活、分装，得到白蛋白制品。

下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。