[发明专利]一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于鸡病防控技术领域，具体地说，涉及一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用。

背景技术

新城疫的防控以免疫预防为主。国内外己广泛推广和使用的有灭活苗、中等毒力活疫苗(Ⅰ系)及低毒力活疫苗(Ⅱ系、IV系等)。灭活疫苗免疫效果较好，但需要肌肉注射，费工费时，且影响鸡肉品质；中等毒力活疫苗对雏鸡有较强的毒副反应；低毒力活疫苗使用较方便，毒副作用小，但冷藏条件要求高，常因保存或使用不当而影响疫苗免疫效果；而且现有疫苗均不能用于鸡胚免疫。因此，研发一种可18日龄鸡胚免疫疫苗，使雏鸡提前获得特异性免疫力(即超前免疫)，成为当前防控鸡新城疫的研究热点。现有技术中，急需一种鸡胚接种疫苗的制备方法及应用。

发明内容

为了弥补现有技术中的空白，本发明提出了一种新城疫鸡胚接种疫苗的制备方法及应用，采用本发明的疫苗进行鸡胚免疫，具有安全、无任何毒副反应、减少应激、免疫效果好和成本低等优点。

其技术方案如下：

一种鸡胚接种疫苗的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：接种：将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种进行适当稀释，接种发育良好的9～10日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；

步骤2：孵育和观察：鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却；

步骤3：收获：将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入抗生素，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；

步骤4：疫苗配制：将无菌检验、病毒含量测定合格的若干组鸡胚液滤过，混合于同一无菌容器内，按规定羽份，加入7％蔗糖、16％脱脂牛奶作稳定剂，同时加入抗生素充分摇匀，定量分装，每羽份病毒含量应不低于10^3.0EID₅₀，分装后迅速进行冷冻真空干燥；

步骤5：疫苗检验：主要包括物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验和效力检验。

优选地，步骤1中将新城疫病毒TS09-C株稀释至10^－3或10^－4。

优选地，步骤3中抗生素的用量为1000u/ml。

优选地，步骤4中抗生素的用量为1000u/ml。

本发明同时还提供一种上述鸡胚接种疫苗在预防鸡新城疫中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

鸡胚接种方法相对于传统的疫苗接种方法(如滴鼻或点眼、注射、喷雾、饮水、拌料等)来说，具有安全、无任何毒副反应、减少应激、免疫效果好等优点，同时，在养禽业中经鸡胚接种疫苗与雏鸡孵出后接种疫苗相比，因为实现了疫苗接种的机械化和自动化(使用自动消毒、注射、封孔于一体的多头蛋内注射器，与孵化场的落盘同步进行)，免疫剂量仅为现有活疫苗的1/1000，所以不仅节省了疫苗免疫成本，而且减少了劳动力开支。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

实施例1

一种鸡胚接种疫苗的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：接种。将新城疫病毒TS09-C株生产用毒种稀释至10^－3，接种发育良好的9日龄SPF鸡胚，每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36～37℃继续孵育，不必翻蛋；

步骤2：孵育和观察。鸡胚接种后，每日照蛋1次，将在48小时前死亡的鸡胚弃去，48小时后，每4～8小时照蛋一次，死亡的鸡胚随时取出，直到96或120小时，不论死亡与否，全部取出，气室向上直立，置于2～8℃冷却。

步骤3：收获。将冷却4～24小时的鸡胚取出，用碘酊消毒气室部位，然后以无菌手术剥除气室部卵壳，揭去卵壳膜，剪破绒毛尿囊膜及羊膜，勿使卵黄破裂，吸取鸡胚液，每若干个鸡胚的胚液混合为一组，收获后的胚液置于灭菌瓶中，加入适宜的抗生素(1000u/ml)，在2～8℃冷库处理4小时以上，留样后，结冻保存，在收获胚液的同时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用；