[发明专利]一种测定运动小鼠胰腺组织样品中胰蛋白酶的方法

说明书

本发明属于电化学技术领域，以肽为识别单元和亚甲基蓝为信号分子对胰蛋白酶含量进行检测。利用利用戊二醛法，通过肽末端氨基与DNA氨基作用，将肽和DNA交联，得肽/DNA；然后利用Au原子与肽末端巯基之间作用，将肽/DNA修饰在金电极表面；再加入H1和H2，发生杂交链式反应形成DNA双链，然后加入亚甲基蓝，亚甲基蓝扦插在形成的DNA双链中；当有目标物胰蛋白酶存在时，胰蛋白酶将肽切割导致扦插有亚甲基蓝的DNA双链从电极上脱落，电化学信号降低，根据电化学信号的强弱实现目标物胰蛋白酶的测定，建立了一种对运动小鼠胰腺组织样品中胰蛋白酶高灵敏度特异性检测的电化学方法，方法具有简单，成本低，灵敏度高的特点。

技术领域

本发明属于电化学技术领域，以肽为识别单元和亚甲基蓝为信号分子对胰蛋白酶含量进行检测。具体涉及一种测定运动小鼠胰腺组织样品中胰蛋白酶的方法。

背景技术

胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。胰蛋白酶是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。

目前发展起来的测定胰蛋白酶的方法主要有紫外分光光度法(Zhang L,Du J.Asensitive and label-free trypsin colorimetric sensor with cytochrome c as asubstrate[J].Biosensors&Bioelectronics,2016,79:347-352.)、液态晶体法(Chuang CH,Lin Y C,Chen W L,et al.Detecting trypsin at liquid crystal/aqueousinterface by using surface-immobilized bovine serum albumin.[J].Biosensors&Bioelectronics,2015,78.)、荧光法(穆丽璇,师文生.胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法:,CN104152141A[P].2014；贾兰,陈松,刘祥,侯文娟,张耀东.一种用于胰蛋白酶检测的荧光探针及其制备方法:,CN104946249A[P].2015)、电化学方法(Ru-Ping L,Xiao-Cui T,Ping Q,et al.Multiplexed Electrochemical Detection of Trypsin andChymotrypsin Based on Distinguishable Signal Nanoprobes[J].AnalyticalChemistry,2014,86(18):9256-9263；Qiang Yi,Qicai Liu,Feng Gao,Qingquan Chen,Guina Wang.Application of an Electrochemical Immunosensor with a MWCNT/PDAAModified Electrode for Detection of Serum Trypsin[J].Sensors,2014,14(6):10203-10212.)、石英晶体微天平法(Stoytcheva M,Zlatev R,Cosnier S,et al.Highsensitive trypsin activity evaluation applying a nanostructured QCM-sensor[J].Biosensors&Bioelectronics,2012,41(1):862–866；Bayramoglu G,Arica MY.Development of a sensitive method for selection of affinity ligand fortrypsin using quartz crystal microbalance sensor.[J].Bioprocess&BiosystemsEngineering,2012,35(3):423-431.)、目视比色法(Zaccheo B A,Crooks R M.Self-Powered Sensor for Naked-Eye Detection of Serum Trypsin[J].AnalyticalChemistry,2011,83(4):1185-8.)等。但是，这些方法各有其缺点。