[发明专利]一种改良的Neurobasal B27培养基、制备方法及应用

权利要求书

1.一种改良的NeurobasalB27培养基，其特征在于，每升Neurobasal培 养液中含有以下组分：生物素0.09-0.11g、皮质酮18-22μg、L-肉毒碱1-3g、亚 油酸0.9-1.1g、乙醇胺0.9-1.1g、亚麻酸0.9-1.1g、D(+)-半乳糖13-17g、孕酮6-7μg、 腐胺二盐酸盐15-17g、视黄醇乙酸酯0.08-0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白 2.2-2.8g、DL-α-生育酚0.8-1.5g、过氧化氢酶2-3g、DL-α-生育酚乙酸酯0.9-1.2g、 还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸42-52μg、超氧化物歧化酶2-3g、转铁蛋白 4-6g、人胰岛素3-5g、亚硒酸钠0.12-0.16mg。

2.根据权利要求1所述的改良的NeurobasalB27培养基，其特征在于，每 升Neurobasal培养液中含有以下组分：生物素0.1g、皮质酮20μg、L-肉毒碱 2g、亚油酸1g、乙醇胺1g、亚麻酸1g、D(+)-半乳糖15g、孕酮6.3μg、腐胺二 盐酸盐16.1g、视黄醇乙酸酯0.1g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.5g、DL-α-生育 酚1g、过氧化氢酶2.5g、DL-α-生育酚乙酸酯1g、还原型谷胱甘肽1g、硫辛酸 47μg、超氧化物歧化酶2.5g、转铁蛋白5g、人胰岛素4g、亚硒酸钠0.146mg。

3.根据权利要求1所述的改良的NeurobasalB27培养基，其特征在于，每 升Neurobasal培养液中含有以下组分：生物素0.09g、皮质酮18μg、L-肉毒碱 1g、亚油酸1.1g、乙醇胺1.1g、亚麻酸1.1g、D(+)-半乳糖17g、孕酮6.1μg、 腐胺二盐酸盐15g、视黄醇乙酸酯0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.8g、DL-α- 生育酚1.5g、过氧化氢酶3g、DL-α-生育酚乙酸酯1.2g、还原型谷胱甘肽1.3g、 硫辛酸51μg、超氧化物歧化酶2.8g、转铁蛋白5g、人胰岛素4g、亚硒酸钠0.15mg。

4.根据权利要求1所述的改良的NeurobasalB27培养基，其特征在于，每 升Neurobasal培养液中含有以下组分：生物素0.11g、皮质酮22μg、L-肉毒碱 3g、亚油酸0.9g、乙醇胺0.9g、亚麻酸1g、D(+)-半乳糖14g、孕酮7μg、腐胺 二盐酸盐17g、视黄醇乙酸酯0.09g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.2g、DL-α-生 育酚0.9g、过氧化氢酶2.2g、DL-α-生育酚乙酸酯1g、还原型谷胱甘肽0.8g、 硫辛酸43μg、超氧化物歧化酶2.3g、转铁蛋白4.2g、人胰岛素3.2g、亚硒酸钠 0.12mg。

5.根据权利要求1所述的改良的NeurobasalB27培养基的制备方法，其特 征在于，每升改良的NeurobasalB27培养基按照以下步骤制备：

步骤1，称取0.09-0.11g的生物素、18-22μg的皮质酮、1-3g的L-肉毒碱、 0.9-1.1g的亚油酸、0.9-1.1g的乙醇胺、0.9-1.1g的亚麻酸、13-17g的D(+)-半乳 糖、6-7μg的孕酮、15-17g的腐胺二盐酸盐、0.08-0.12g的视黄醇乙酸酯、2.2-2.8g 的去甲状腺激素牛血清蛋白、0.8-1.5g的DL-α-生育酚、2-3g的过氧化氢酶、 0.9-1.2g的DL-α-生育酚乙酸酯、0.8-1.3g的还原型谷胱甘肽、42-52μg的硫辛 酸、2-3g的超氧化物歧化酶、4-6g的转铁蛋白、3-5g的人胰岛素、0.12-0.16mg 的亚硒酸钠；

步骤2，将步骤1中各组分混合后加入到1000mL的Neurobasal培养液中， 震荡搅拌，充分溶化各组分，获得溶液；

步骤3，将步骤2中获得的溶液，以孔径为0.22μm的滤菌膜过滤除菌，得 到改良的NeurobasalB27培养基。

6.如权利要求1中所述的改良的NeurobasalB27培养基，在胚胎干细胞 培养中的应用。