[发明专利]一种改良的Neurobasal B27培养基、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种改良的NeurobasalB27培养 基，本发明还涉及一种改良的NeurobasalB27培养基的制备方法及应用。

背景技术

胚胎干细胞(EmbryonicStemCell，ES细胞)源于着床前囊胚期内细胞团 (InnerCellMass，ICM)，具有自我更新能力和发育全能性，胚胎干细胞的体 外分化为研究胚胎早期发育的细胞和分子机制提供了良好的模型。

甲状腺激素是胎儿脑发育的必需激素，在碘缺乏地区，由于碘缺乏导致的 母体妊娠期甲状腺激素缺乏，可以导致胎儿生长发育停滞、智力低下、运动失 调，严重者发生呆小症。因此，研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞 的影响，以及探讨甲状腺激素对胎儿早期的大脑皮层发育的影响，具有重要的 意义。

现有技术中，培养胚胎干细胞时主要采用的是市售的NeurobasalB27培养 基，然而市售的NeurobasalB27培养基中含有甲状腺激素，无法用于研究甲状 腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响。

发明内容

本发明提供的一种改良的NeurobasalB27培养基、制备方法及应用，可以 用于研究甲状腺激素对胚胎干细胞分化为神经细胞的影响。

本发明的第一个目的是提供一种改良的NeurobasalB27培养基，每升 Neurobasal培养液中含有以下组分：生物素0.09-0.11g、皮质酮18-22μg、L-肉 毒碱1-3g、亚油酸0.9-1.1g、乙醇胺0.9-1.1g、亚麻酸0.9-1.1g、D(+)-半乳糖 13-17g、孕酮6-7μg、腐胺二盐酸盐15-17g、视黄醇乙酸酯0.08-0.12g、去甲状 腺激素牛血清蛋白2.2-2.8g、DL-α-生育酚0.8-1.5g、过氧化氢酶2-3g、DL-α- 生育酚乙酸酯0.9-1.2g、还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸42-52μg、超氧化物 歧化酶2-3g、转铁蛋白4-6g、人胰岛素3-5g、亚硒酸钠0.12-0.16mg。

优选的，本发明一种改良的NeurobasalB27培养基，每升Neurobasal培养 液中含有以下组分：生物素0.1g、皮质酮20μg、L-肉毒碱2g、亚油酸1g、乙 醇胺1g、亚麻酸1g、D(+)-半乳糖15g、孕酮6.3μg、腐胺二盐酸盐16.1g、视 黄醇乙酸酯0.1g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.5g、DL-α-生育酚1g、过氧化氢 酶2.5g、DL-α-生育酚乙酸酯1g、还原型谷胱甘肽1g、硫辛酸47μg、超氧化物 歧化酶2.5g、转铁蛋白5g、人胰岛素4g、亚硒酸钠0.μ46mg。

优选的，本发明一种改良的NeurobasalB27培养基，每升Neurobasal培养 液中含有以下组分：生物素0.09g、皮质酮18μg、L-肉毒碱1g、亚油酸1.1g、 乙醇胺1.1g、亚麻酸1.1g、D(+)-半乳糖17g、孕酮6.1μg、腐胺二盐酸盐15g、 视黄醇乙酸酯0.12g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.8g、DL-α-生育酚1.5g、过氧 化氢酶3g、DL-α-生育酚乙酸酯1.2g、还原型谷胱甘肽1.3g、硫辛酸51μg、超 氧化物歧化酶2.8g、转铁蛋白5g、人胰岛素4g、亚硒酸钠0.15mg。

优选的，本发明一种改良的NeurobasalB27培养基，每升Neurobasal培养 液中含有以下组分：生物素0.11g、皮质酮22μg、L-肉毒碱3g、亚油酸0.9g、 乙醇胺0.9g、亚麻酸1g、D(+)-半乳糖14g、孕酮7μg、腐胺二盐酸盐17g、视 黄醇乙酸酯0.09g、去甲状腺激素牛血清蛋白2.2g、DL-α-生育酚0.9g、过氧化 氢酶2.2g、DL-α-生育酚乙酸酯1g、还原型谷胱甘肽0.8g、硫辛酸43μg、超氧 化物歧化酶2.3g、转铁蛋白4.2g、人胰岛素3.2g、亚硒酸钠0.12mg。

本发明的第二个目的是提供一种改良的NeurobasalB27培养基的制备方 法，每升改良的NeurobasalB27培养基按照以下步骤制备：