[发明专利]检测EGFR和/或K-ras基因突变的引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.用于检测人类EGFR基因第18～21号外显子突变的引物及探针，包括以下四组引物和探针的核苷酸序列：

(1)用于检测EGFR基因第18号外显子突变的引物及探针：

上游引物SEQ ID NO:1：5’-CCTTGTCTCTGTGTTCTTGT-3’；

下游引物SEQ ID NO:2：5’-TGTGCCAGGGACCTTAC-3’；

目标探针SEQ ID NO:3：5’-CCGGAGCCCAGCTCTTTGATCT-3’；

内参探针SEQ ID NO:4：5’-CAGCTTGTGGAGCCTCTTACACCC-3’；

(2)用于检测EGFR基因第19号外显子突变的引物及探针：

上游引物SEQ ID NO:5：5’-TAAAATTCCCGTCGCTATCAA-3’；

下游引物SEQ ID NO:6：5’-AAAGGTGGGCCTGAGGTTCA-3’；

目标探针SEQ ID NO:8：5’-AGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCG-3’；

内参探针SEQ ID NO:7：5’-GTTCAGAGCCATGGACCC-3’；

(3)用于检测EGFR基因第20号外显子突变的引物及探针：

上游引物SEQ ID NO:10：5’-AGGCAGCCGAAGGGCA-3’；

下游引物SEQ ID NO:9：5’-CCTCACCTCCACCGTGCA-3’；

突变型探针SEQ ID NO:11：5’-TGAGCCGCGTGATGA-3’；

野生型探针SEQ ID NO:12：5’-TGAGCCGCATGATGA-3’；

(4)用于检测EGFR基因第21号外显子突变的引物及探针：

上游引物SEQ ID NO:13：5’-AACACCGCAGCATGTCAAGA-3’；

下游引物SEQ ID NO:14：5’-TTCTCTTCCGCACCCAGC-3’；

突变型探针SEQ ID NO:15：5’-TTGGGCGGGCCAAACTGCTG-3’；

野生型探针SEQ ID NO:16：5’-TTGGGCTGGCCAAACTGCTG-3’。

2.根据权利要求1所述的引物及探针，其特征在于，所有探针均带有荧光基团和淬灭基团，所述目标探针与所述内参探针、所述野生型探针与所述突变型探针的荧光基团不同。

3.根据权利要求2所述的引物及探针，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、Cy5和Cy3。

4.根据权利要求2所述的引物及探针，其特征在于，所述淬灭基团选自BHQ1、MGB、TAMARA和BHQ2。

5.一种用于检测人类EGFR基因突变的试剂盒，其包括如权利要求1-4任一项所述的引物及探针。

6.一种检测人类EGFR基因突变的装置，其包括：PCR混合液制备单元，数字PCR反应单元和信息处理单元；

其中，所述PCR混合液制备单元配置用于将待测DNA模板，针对目标区域的上、下游PCR扩增引物，检测探针以及PCR预混液混合，制备得到数字PCR混合液；

所述上、下游PCR扩增引物和所述检测探针为如权利要求1-4任一项所述的引物及探针。

7.根据权利要求6所述的装置，其特征在于，所述PCR混合液的每个反应体系包含：0.3～30ng的DNA模板，含量分别为500～700nM的上、下游PCR扩增引物以及含量为200～500nM的探针。

8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述PCR混合液的每个反应体系包含：1～6ng的DNA模板，600nM的上、下游PCR扩增引物以及250nM的探针。